【摘要】：目的:探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、提取和體外擴(kuò)增的最佳條件,然后體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)向軟骨細(xì)胞定向分化,并對分化后細(xì)胞進(jìn)行鑒定,為氣管軟骨組織工程提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),然后將培養(yǎng)的細(xì)胞在TGF-β1、地塞米松(Dex)、胰島素及維生素C(Vit C)等誘導(dǎo)下進(jìn)行分化。在光鏡下觀察誘導(dǎo)細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變,然后用蘇木精-伊紅(HE)染色、甲苯胺藍(lán)染色等方法檢測誘導(dǎo)細(xì)胞的分泌功能,并采用RT-PCR方法檢測誘導(dǎo)后細(xì)胞中II型膠原(Col II)的表達(dá)。 結(jié)果:體外培養(yǎng)的原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)48小時(shí)內(nèi)可見有少量貼壁細(xì)胞,7天后貼壁細(xì)胞明顯增多,呈梭形柵欄樣或多邊形分布,9天后可見呈集落生長的細(xì)胞。BMSCs在轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β1)、地塞米松(Dex)、胰島素及維生素C(Vit C)等作用下,7天后可見少量細(xì)胞由梭形變?yōu)椴灰?guī)則或橢圓形,隨后聚集形成軟骨樣結(jié)節(jié)。HE染色顯示,誘導(dǎo)后細(xì)胞呈軟骨細(xì)胞樣形態(tài);甲苯胺藍(lán)染色的結(jié)果示細(xì)胞外基質(zhì)異染,呈藍(lán)色。而RT-PCR的結(jié)果顯示,誘導(dǎo)分化后的BMSCs可表達(dá)Col II的mRNA。 結(jié)論:采用全骨髓貼壁法可穩(wěn)定獲得純度較高的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),并在轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β1)、地塞米松(Dex)、胰島素及維生素C(Vit C)等作用下可被誘導(dǎo)分化為軟骨樣細(xì)胞。
【圖文】：

BMSCs經(jīng)誘導(dǎo)后，可見細(xì)胞體積增大，逐漸變?yōu)槎嘟切�、多邊�?br>

圖 8 圖中 M 代表的是 Marker、A 代表的是經(jīng)過誘導(dǎo)后的細(xì)胞，可以看到在 500-800bp 之間有一條明顯條帶，，與預(yù)期 510bp 的結(jié)果相符
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2521580