發(fā)布時間：2019-07-18 08:15

【摘要】：目的：在前期實驗中，我們通過對不同時間低氧培養(yǎng)的小膠質(zhì)細胞(BV2細胞)的功能狀態(tài)研究，發(fā)現(xiàn)BV2細胞在低氧培養(yǎng)1小時和12小時下分別起到神經(jīng)保護和神經(jīng)損傷的作用。本實驗將進一步探討B(tài)V2細胞JNK信號通路對小膠質(zhì)細胞功能及腫瘤壞死因子受體(TNFR)表達的影響。 方法：以小鼠小膠質(zhì)細胞瘤(BV2細胞株)及大鼠嗜鉻細胞瘤(PC12細胞株)為研究對象，，分別用來代表小膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元。將BV2細胞實驗分組為：正常對照組(常氧組)、低氧1h組、低氧1h+SP600125組、低氧12h組、低氧12h+SP600125組。應用western blot檢測低氧下BV2細胞JNK信號通路阻斷劑SP600125最佳阻斷濃度。然后在不同程度低氧及有無SP600125干預下培養(yǎng)BV2細胞，用其培養(yǎng)液來培養(yǎng)PC12細胞，通過CCK-8法測定PC12細胞存活率并以此來反映BV2細胞功能，同時應用western blot檢測BV2細胞TNF-α受體TNFR1與TNFR2表達情況，應用ELISA法檢測在不同功能狀態(tài)下BV2細胞分泌表達TNF-α、IL-1β、NGF情況。 結(jié)果： 1.正常對照組和損傷對照組PC12細胞的存活率分別為：100%和52.37%；BV2細胞低氧培養(yǎng)1h時，PC12細胞的存活率為75.96%，加入SP600125后PC12細胞存活率增加到81.88%，差異有顯著性(P0.01)；BV2細胞低氧培養(yǎng)12h時，PC12細胞的存活率為36.87%，加入SP600125后PC12細胞存活率可達57.61%，差異有顯著性(P0.01)。 2.在正常情況下，BV2細胞表面無TNFR1表達，僅有少量TNFR2表達。在低氧培養(yǎng)1h時，TNFR2表達增多，加入SP600125能進一步增加TNFR2的表達(P0.05)；在低氧培養(yǎng)12h時，TNFR1的表達增多，加入SP600125能進一步減少TNFR1的表達(P0.05)。 3. BV2細胞在常氧培養(yǎng)下，其分泌的TNF-α、 IL-1β、 NGF分別為447.77±7.62pg/ml、4.38±0.29pg/ml和122.19±4.94pg/ml；BV2細胞經(jīng)低氧培養(yǎng)1h，其分泌的TNF-α、IL-1β、NGF均有所增加，分別為612.19±15.06pg/ml、15.22±0.73pg/ml和214.22±5.19pg/ml；當?shù)脱跖囵B(yǎng)12h，TNF-α和IL-1β水平增加到1265.24±14.36pg/ml、22.87±1.03pg/ml，而NGF的水平則下降到25.47±1.74pg/ml。加入SP600125后能明顯減少TNF-α和IL-1β的分泌而增加NGF的分泌(P0.01)。 結(jié)論： 1.缺氧條件下，JNK信號通路介導了BV2細胞的損傷作用。 2. JNK信號通路參與調(diào)控NGF、TNF-α、IL-1β的分泌。 3. JNK信號通路可影響TNFR1與TNFR2的表達。
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圖片說明： 用 SPSS19.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料數(shù)據(jù)均。率的比較用卡方檢驗，兩組間比較用 t 檢驗，多組比驗標準均取 P<0.05 差異具有統(tǒng)計學意義。結(jié) 果 與 PC12 細胞密度與吸光度值標準曲線的繪制與方程的 BV2 細胞不同密度所對應的平均吸光度值(表 1)，應用胞密度與吸光度值標準曲線(圖 1)，得方程：y=25.00x-2.8，此方程用于計算下面實驗中 BV2 細胞密度。密度 BV2 細胞的吸光度值80 40 20 10 5 2.5 1.25 3.358 1.648 0.854 0.462 0.289 0.223 0.199
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圖片說明： 根據(jù) PC12 細胞不同密度所對應的平均吸光度值(表 2)，建立 PC1度值標準曲線(圖 2)，并得方程：y=88.62x-12.48 (x:吸光度值，方程用于計算下面實驗中 PC12 細胞密度。表 2 不同密度 PC12 細胞的吸光度度(104/ml) 300 150 75 37.5 18.75 9.375 光度值 3.486 1.883 1.042 0.573 0.324 0.232
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R363

【參考文獻】

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本文編號：2515751