【摘要】：第一部分優(yōu)化兔主動脈內(nèi)皮細胞的分離培養(yǎng)和鑒定 目的：為構(gòu)建骨組織工程血管化提供種子細胞。 方法：,采用血管內(nèi)膜外翻和膠原酶消化法分離培養(yǎng)兔取主動脈內(nèi)皮細胞并傳代,倒置顯微鏡、透射電鏡觀察和免疫熒光鑒定。 結(jié)果：鑒定培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細胞,倒置顯微鏡下觀察內(nèi)皮細胞呈緊密排列、短梭多角形的“鵝卵石”形態(tài),透射電鏡可見內(nèi)皮細胞特征性W—P小體,免疫熒光鑒定CD31(+)。 結(jié)論：兔血管內(nèi)皮細胞的分離培養(yǎng)成功,且純度高、數(shù)量多、狀態(tài)好。本法可為骨組織工程血管化的研究提供種子細胞。 第二部分骨內(nèi)注射無水酒精建立兔股骨頭壞死模型 背景：股骨頭壞死在青壯年中患病人數(shù)越來越多,它是一個具有明顯高致殘的疾病。目前缺少可靠的股骨頭壞死動物模型來評價新的治療方法。 目的：這項研究是為了建立合適的股骨頭壞死動物模型,它可以評價各種方法的療效。 方法：X線透視下將新西蘭兔股骨頭中心鉆孔并注入無水酒精。經(jīng)過2,4和6周處死動物獲取股骨頭。采用X射線,磁共振成像(MRI)和病理切片進行了分析和記錄。 結(jié)果：14天后所有的動物被證實了股骨頭部分壞死。股骨頭壞死的形態(tài)學改變(完整的外觀形態(tài),大體循環(huán)和關(guān)節(jié)軟骨)與人類早期股骨頭壞死是相似的。 結(jié)論：我們建立了良好的股骨頭壞死動物模型。它可以用于治療股骨頭壞死的實驗研究。 第三部分組織工程化凝膠誘導股骨頭壞死血管化的體內(nèi)實驗研究 目的：早期股骨頭壞死的治療仍是臨床面臨的挑戰(zhàn)。內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞(EC/ SMC)已被證明在動物模型體內(nèi)促進血管和骨再生。我們嘗試證明：EC/SMC移植可通過促進血管生成和骨再生治療股骨頭壞死。 材料與方法：先建立無水酒精誘導兔股骨頭壞死模型,制作出VEGF和MCP-1的緩釋微球與膠原凝膠和EC/SMC形成一個聚合物。然后將這種組織工程聚合物凝膠注射到骨壞死區(qū)域。干預后第2,4和6周,通過影像學(X光和磁共振成像)和病理學(HE)染色和免疫組化檢測股骨頭壞死后血管和骨組織再生。使用Image-Pro Plus圖像分析軟件對新生血管密度,新生血管的直徑和包被平滑肌細胞的成熟新生血管數(shù)量進行分析。利用二樣本均數(shù)T檢驗,P0.05具有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果：X線檢查,MRI,組織病理學檢測顯示骨壞死面積縮小,新生毛細血管和新生骨修復壞死區(qū)域。免疫組化顯示a-SMA(+)的血管形成。圖像軟件定量分析細胞/微球/凝膠組的新生血管密度,新生血管直徑和a-SMA(+)的血管。明顯高于其他各組。 結(jié)論：骨壞死區(qū)域形成穩(wěn)定和功能成熟的血管網(wǎng),并證示EC/ SMC在治療性血管再生的作用。局部注射組織工程化凝膠提供了治療早期股骨頭壞死的新方法。
[Abstract]:Part one: to optimize the isolation, culture and identification of rabbit aortic endothelial cells objective: to provide seed cells for the construction of vascularization of bone tissue engineering. Methods: rabbit aortic endothelial cells were isolated and cultured by intimal valgus and collagenase digestion and subcultured by inverted microscope, observed by transmission electron microscope and identified by immunofluorescence. Results: the cultured vascular endothelial cells were identified. The endothelial cells were closely arranged under inverted microscope, the "pebbles" of short shuttle polyhedral shape were observed, the characteristic W 鈮，

本文編號：2510179