【摘要】：目的：NK細(xì)胞是機(jī)體固有免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞,NK細(xì)胞NKG2D受體與其配體MICA的識別在白血病的免疫監(jiān)視中發(fā)揮重要作用,但是白血病細(xì)胞仍能逃逸NK細(xì)胞的這一免疫監(jiān)視作用,考慮與腫瘤細(xì)胞表面MICA配體脫落形成可溶性MICA有關(guān)。因此,我們在體外研究重組可溶性MICA蛋白對NK細(xì)胞NKG2D的表達(dá)、殺傷活性及分泌IFN-γ的影響。探討可溶性MICA在白血病免疫逃逸機(jī)制中的作用,為白血病免疫治療尋找新的方向。 方法：Ficoll密度梯度離心法分離健康人外周血單個核細(xì)胞(PBMNC),運(yùn)用免疫磁珠陽性分選NK細(xì)胞。流式細(xì)胞儀鑒定其純度。將培養(yǎng)NK細(xì)胞分為空白對照組及實驗組�？瞻讓φ战M加等體積的完全培養(yǎng)基,實驗組分別加不同濃度重組sMICA200μg/L、500μ、g/L、800μg/L,與NK細(xì)胞孵育過夜后,收集NK細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測其NKG2D受體表達(dá)水平,收集培養(yǎng)上清用-LISA試劑盒檢測分泌IFN-γ水平,并向孵育后的NK細(xì)胞中加入K562細(xì)胞作用4小時,用LDH釋放法檢測NK細(xì)胞對其殺傷活性。 結(jié)果：經(jīng)免疫磁珠分選后NK細(xì)胞純度達(dá)90%以上。重組sMICA200μg/L、500μg/L、800μg/L組NK細(xì)胞NKG2D的表達(dá)水平、對靶細(xì)胞的殺傷活性、IFN-γ分泌水平均明顯低于空白對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。且隨重組sMICA濃度增加,NK細(xì)胞NKG2D的表達(dá)水平、對靶細(xì)胞的殺傷活性、IFN-γ分泌水平均逐漸降低,不同濃度組間比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：重組可溶性MICA蛋自可下調(diào)NK細(xì)胞NKG2D表達(dá)；抑制殺傷活性；降低IFN-γ分泌水平；急性白血病細(xì)胞表面脫落的sMICA蛋白損害NKG2D-MICA的抗白血病效應(yīng),這一機(jī)制可能與急性白血病免疫逃逸有關(guān)。以NKG2D-MICA為基礎(chǔ)的白血病免疫治療方法值得深入研究。
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【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2491266