發(fā)布時間：2019-05-28 16:24

【摘要】：目的 :建立豬naive-like誘導(dǎo)性多能干(induced pluripotent stem,i PS)細胞系,并對其進行紅色熒光標(biāo)記,為通過示蹤豬naive i PS細胞發(fā)育和分化的相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。方法:首先利用核轉(zhuǎn)染技術(shù)向巴馬小型豬胎兒成纖維細胞(porcine embryonic fibroblast,PEF)中轉(zhuǎn)入鼠源OCT4、SOX2、KLF4和c-MYC轉(zhuǎn)錄因子表達載體Tet O-FUW-OSKM,并同時轉(zhuǎn)入激活表達載體FUW-M2rt TA,采用白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)結(jié)合堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)的培養(yǎng)體系進行培養(yǎng),通過在培養(yǎng)液中添加鹽酸多西環(huán)素(doxycycline hyclate,DOX)進行誘導(dǎo),建立起豬i PS細胞系,并對細胞系的多能性進行鑒定。在此基礎(chǔ)上,向i PS細胞系轉(zhuǎn)入紅色熒光蛋白表達載體,對其進行標(biāo)記,并鑒定被紅色熒光標(biāo)記后的細胞是否仍然具有多能性。結(jié)果:所建立的i PS細胞系克隆呈三維立體生長,可以進行單細胞傳代培養(yǎng)至30代以上,核型正常,堿性磷酸酶染色呈陽性,表達多種干細胞多能因子,利用LIF/STAT3信號通路維持其增殖,體外可分化形成表達三胚層相關(guān)基因的類胚體,為豬naive-like i PS細胞系。成功對所建立的i PS細胞系進行紅色熒光標(biāo)記,堿性磷酸酶染色和免疫熒光染色結(jié)果顯示被紅色熒光標(biāo)記的i PS細胞的多能性依然存在。結(jié)論:成功建立了穩(wěn)定表達紅色熒光蛋白的豬naive-like i PS細胞系。
[Abstract]:Aim: to establish a pig naive-like induced pluripotent (induced pluripotent stem,i PS cell line and label it with red fluorescence, so as to lay a foundation for the study of the development and differentiation of pig naive i PS cells. Methods: firstly, mouse OCT4,SOX2,KLF4 and c-MYC transcription factor expression vector Tet O 鈮，

本文編號：2487195