【摘要】：調(diào)節(jié)性T細胞(Regulatory T cells, Treg)是一類通過抑制T細胞增殖和細胞因子分泌進而抑制機體免疫反應、防止持續(xù)炎癥反應攻擊健康組織的T細胞在免疫病理、移植物耐受、保持自身抗原的耐受性以阻止自身免疫反應和維持機體免疫平衡方面,Treg均發(fā)揮著重要的作用。Treg細胞功能缺陷可導致人類多種自身免疫性疾病,如類風濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、重癥肌無力等。Treg細胞包括CD4+Treg. CD8+Treg、NKTTreg和雙陰性Treg細胞四大類。其中,CD4+CD25+Treg細胞是目前研究最為廣泛的Treg細胞。CD4+CD25+Treg細胞除表達CD25分子外,還表達一系列免疫調(diào)節(jié)相關(guān)的標志物,如細胞表面的細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原4(Cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4, CTLA-4)、糖皮質(zhì)激素誘導的腫瘤壞死因子受體(Glucocorticoid induced tumor necrosis factor receptor, GITR)家族相關(guān)基因和細胞核內(nèi)的叉頭／翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子P3(Forkhad box P3, Foxp3)。Foxp3是Treg細胞維持自身免疫平衡所必需的分子。體內(nèi)和體外實驗都已證明,轉(zhuǎn)化生長因子β1(Transforming growth factor β, TGF-β1)可誘導CD4+T細胞表達Foxp3,形成具有免疫抑制功能的Treg細胞。 丫δ T細胞因其表面表達由γ鏈和δ鏈組成的T細胞受體(T cell receptor, TCR)而得名,在抗原識別和免疫應答中具有特殊的作用。γδT細胞主要分布于皮膚、小腸、肺和生殖器官等粘膜及皮下組織,而在人類外周血中,TCR γδ約表達于0.5%-10%的CD3+T細胞表面。γδ T細胞又根據(jù)δ鏈的不同分為V81T細胞和V82T細胞兩種類型。Vδ1T細胞多位于小腸上皮組織中,是小腸上皮內(nèi)淋巴細胞(Intestine intraepithelial lymphocytes, iIELs)的重要組成部分,而其在外周血中的數(shù)量僅為γδT細胞總量的20%；V82T細胞主要見于外周血,約占γδT細胞總量的70%。Vδ2T細胞具有顯著的細胞毒性作用和對微生物重復感染的記憶反應功能。由于人類外周血中V81T細胞含量較少,并且體外擴增存在一定難度,因此對外周血中Vδ1T細胞的生物學特性和功能知之甚少。iIELs主要位于小腸絨毛柱狀上皮內(nèi),為一類組織松散的浸潤性淋巴細胞。iIELs由于數(shù)量眾多并在粘膜免疫防御中具有重要作用,因而成為IELs研究的熱點之一。iIELs的表型和功能呈現(xiàn)多樣性,依據(jù)表面TCR組成的不同分為αβ T細胞和γδ T細胞。前者具有顯著的細胞毒活性,因而參與小腸粘膜的免疫應答反應；后者的功能尚未完全明確,但已有的研究顯示該細胞功能具有多樣性,包括免疫防御、細胞毒活性等。而最近更多的研究顯示,γδT細胞具有免疫調(diào)節(jié)潛能。因此,本文將針對這一科學問題展開相關(guān)研究。 本研究旨在驗證人外周血單個核細胞(Peripheral blood monouclear cells, PBMCs)來源的Vδ1T細胞以及小鼠iIELs來源的γδ T細胞是否具有免疫調(diào)節(jié)功能。根據(jù)以上研究內(nèi)容,本論文分為兩部分。第一部分通過在有或無外源性轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)的情況下,檢測抗TCR Vδ1單克隆抗體(monoclonal antibody, mAb)擴增的、人PBMCs來源的V81T細胞內(nèi)Foxp3的表達情況。結(jié)果顯示,即使無外源性TGF-β1,抗TCR Vδ1mAb亦可擴增獲得大量Foxp3+V81T細胞,且Foxp3分子在V81T細胞中穩(wěn)定表達。應用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)檢測抗TCR Vδ1mAb擴增的PBMCs上清中是否存在TGF-β1。結(jié)果顯示,培養(yǎng)上清中存在較高水平的TGF-β1。應用流式細胞技術(shù)(Fluorescence-activated cell sorting, FACS)檢測發(fā)現(xiàn)V81T細胞是TGF-β1的主要來源細胞,且V81T細胞表達較高水平的TGF-β1受體(CD105)。接下來我們檢測了Foxp3+Vδ1T細胞所表達的其它Treg細胞相關(guān)的表面標志物和細胞因子。結(jié)果顯示,V81T細胞可表達GITR、CTLA-4、CD25等Treg細胞常見的表面分子和白介素-10(interleukin-10, IL-10)、TGF-β1。最后我們應用CFSE方法檢測發(fā)現(xiàn), CD25high V51T細胞對CD4+T細胞的增殖具有顯著的抑制作用。以上研究結(jié)果提示,Foxp3+Vδ1T細胞是一種Treg細胞。這為某些腸上皮的炎癥性疾病的發(fā)病和治療、移植免疫免疫耐受機制的研究奠定了基礎(chǔ)。 本論文的第二部分通過分離獲得C57BL/6J小鼠的iIELs,經(jīng)TGF-β1和γδTCR抗體(antibody, Ab)共同作用后,應用流式細胞技術(shù)檢測γδ T細胞內(nèi)Foxp3分子的表達情況。結(jié)果顯示,TGF-β1和γδ TCR抗體可以共同誘導Foxp3+γδ T細胞的產(chǎn)生。同時,我們應用CFSE染色的方法檢測發(fā)現(xiàn),Foxp3+γδ T細胞對CD4+T細胞的增殖具有顯著的抑制作用。以上結(jié)果表明,TGF-β1和γδ TCR抗體在體外能夠共同誘導小鼠的iIELs產(chǎn)生Foxp3+γδ T細胞,并且該細胞具有免疫調(diào)節(jié)功能。這為闡明TGF-β1在小腸上皮免疫調(diào)節(jié)性γδ T細胞產(chǎn)生中的作用,以及某些小腸自身免疫性疾病的發(fā)病機制和治療提供了線索。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R392

【共引文獻】

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本文編號：2472886