【摘要】：研究背景 脂肪組織含有成熟脂肪細胞及脂肪組織來源干細胞(Adipose tissue derived stem cell,簡稱(?)ADSC)。成熟脂肪細胞在天花板培養(yǎng)下,吐脂變成具有干細胞特性的去分化脂肪細胞(Dedifferentiated FAT,簡稱DFAT)。ADSC和DFAT都已被證明具有分化為心肌樣細胞的能力。催產素(Oxytocin,簡稱OT)被證明能將胚胎腫瘤干細胞P19及P19CL6誘導分化成心肌細胞,但它能否將ADSC及DFAT細胞誘導成心肌細胞尚無報道。 實驗目的 檢驗OT能否將ADSC及DFAT誘導成為心肌樣細胞。 實驗方法 從脂肪中分離得到ADSC及成熟脂肪細胞。通過天花板培養(yǎng)足成熟脂肪細胞去分化為DFAT。按照不同誘導的時間(1周,2周,3周)及不同濃度(10-8M,10-7M,10-6M)分組對ADSC和DFAT進行誘導培養(yǎng)。通過RT-PCR,免疫熒光及Western Blot分別在基因水平和蛋白水平檢測心肌特異性標記的表達。以人類心肌組織作為陽性對照,未加誘導的ADSC及DFAT細胞作為陰性對照。 實驗結果 高濃度OT(10-6M)造成實驗細胞大量死亡,無法進行后續(xù)試驗。10-8M及10-7M濃度的催產素誘導三周后,ADSC和(?)DFAT在基因及蛋白水平檢測到心臟特異性標記GATA4, NKX2.5,c-TnT的表達,但是未發(fā)現(xiàn)自主搏動現(xiàn)象。相同誘導條件下,兩種細胞在基因和蛋白水平無顯著差別。 實驗結論 生理濃度和中等濃度的催產素可以將ADSC及DFAI誘導成為心肌樣細胞。
[Abstract]:Background adipose tissue contains mature adipocytes and adipose tissue derived stem cells (Adipose tissue derived stem cell, (?) ADSC).) The ability of adipocytes to differentiate into cardiomyocyte-like cells (DFAT). ADSC and DFAT) has been proved to be able to differentiate into dedifferentiated adipocytes with stem cell characteristics in ceiling-cultured adipocytes. Oxytocin (Oxytocin,) has been proved to be able to induce the differentiation of embryonic tumor stem cells (P19 and P19CL6) into cardiomyocytes, but whether it can induce ADSC and DFAT cells into cardiomyocytes has not been reported. Objective to test whether OT can induce ADSC and DFAT into cardiomyocytes. Methods ADSC and mature adipocytes were isolated from fat. Dedifferentiation of mature adipocytes from ceilings to DFAT. ADSC and DFAT were cultured according to different induction time (1 week, 2 weeks, 3 weeks) and different concentration (10 -8 MN 10 -7 M 10 -6 M). The expression of myocardial specific markers was detected at gene level and protein level by RT-PCR, immunofluorescence and Western Blot, respectively. Human myocardial tissue was used as positive control and uninduced ADSC and DFAT cells as negative control. The results showed that high concentration of OT (10-6 M) resulted in a large number of cell death, which could not be followed up. After induction of oxytocin at 10-8 and 10-7 M concentrations for three weeks, The expression of cardiac specific marker GATA4, NKX2.5,c-TnT was detected in ADSC and (?) DFAT at gene and protein levels, but no autonomic pulsation was found. There was no significant difference in gene and protein levels between the two types of cells under the same induction conditions. Conclusion ADSC and DFAI can be induced into cardiomyocyte-like cells by oxytocin at physiological and medium concentrations.
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R329

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本文編號：2423066