【摘要】：目的:應(yīng)用低鉀飼料致家兔低血鉀模型,測定家兔血漿鉀離子濃度,以觀察低鉀程度,同時觀察骨骼肌組織鉀離子,鈉離子,鎂離子含量,細胞膜上Na,K-ATP酶活性及α1α2亞型的表達情況,探究缺鉀時家兔血漿鉀,骨骼肌組織內(nèi)鉀離子含量的變化規(guī)律,并初步探討其變化的機制。 方法:清潔級健康家兔48只,體重2.0~2.7kg、兔齡12~14周,雄性(河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供),隨機分為6組,每組8只,按低鉀飼喂的時間分為正常對照組(A組)、低鉀飲食3天組(B組)、低鉀飲食6天組(C組)、低鉀飲食9天組(D組)、低鉀飲食12天組(E組)、低鉀飲食15天組(F組)。家兔購入后先放置于安靜、舒適的環(huán)境中,正常飼喂一周后開始用家兔低鉀飼料飼喂,低鉀飲食期間自由攝取蒸餾水。以低鉀飲食開始前當(dāng)天作為第0天,低鉀飲食后第1天作為第1天,依次類推。分別以低鉀飼喂第0天,第3天,第6天,第9天,第12天,第15天作為終點處死動物并留取相應(yīng)標(biāo)本。 標(biāo)本處理當(dāng)天先取出家兔稱重,記錄體重變化情況,后置于安靜環(huán)境下2小時。4%戊巴比妥于耳緣靜脈注射1ml/kg,麻醉后,迅速剪去家兔右下肢兔毛,以75%的乙醇溶液消毒右下肢,用大剪刀剪開其右下肢皮膚,分離筋膜,分別暴露分離比目魚肌和股靜脈。先由股靜脈留取血液樣本2ml,應(yīng)用離子選擇電極法測定血漿鉀離子濃度,后取比目魚肌約2g,去除肌肉上的筋膜組織,準(zhǔn)確稱重,用預(yù)冷生理鹽水沖洗比目魚肌組織,取濾紙反復(fù)吸干,放入標(biāo)記好的凍融管,迅速置于液氮罐中冷凍保存。用以測定Na,K-ATP酶活性,取材結(jié)束-70℃冰箱保存。比目魚肌Na,K-ATP酶活性按照考馬斯亮藍蛋白測定試劑盒,檢測總蛋白含量后用超微量ATP酶測試盒檢測Na,K-ATP酶活性。取比目魚肌約35mg,去除肌肉上的筋膜組織,用預(yù)冷等滲氯化鋰沖洗,取濾紙反復(fù)吸干,準(zhǔn)確稱重,-20℃保存。采用火焰原子吸收光度計測定骨骼肌組織內(nèi)鉀離子,鈉離子,鎂離子含量。取比目魚肌約500-600 mg,去除肌肉上的筋膜組織,用預(yù)冷生理鹽水沖洗比目魚肌組織,取濾紙反復(fù)吸干,放入凍融管,標(biāo)上標(biāo)簽,迅速置于液氮罐中冷凍保存,取材結(jié)束-70℃冰箱保存。采用Western blot測定A組D組F組比目魚肌Na,K-ATP酶α1,α2亞型表達。 所有數(shù)據(jù)通過spss13.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( X±s)表示,組間比較采用單因素方差分析。 結(jié)果: 1家兔低鉀飲食前后體重比較無統(tǒng)計學(xué)意義。 2低鉀飲食3天后即可觀察到血漿鉀離子下降(P0.05),血漿鉀離子隨低鉀飲食天數(shù)增加而逐漸下降。 3低鉀飲食3天后,觀察比目魚肌組織內(nèi)鉀離子含量與A組相比開始降低(P0.05),且隨著低鉀飲食天數(shù)增加,比目魚肌組織內(nèi)鉀離子含量逐漸降低。 4低鉀飲食3天后,觀察比目魚肌組織內(nèi)鈉離子含量與A組相比增加(P0.05),且隨著低鉀飲食天數(shù)增加,比目魚肌組織內(nèi)鈉離子含量逐漸增高。F組比目魚肌組織內(nèi)鎂離子含量相對A組降低(P0.05)。 5低鉀飲食3天后,可觀察到比目魚肌Na,K-ATP酶活性下降(P0.05),且隨著低鉀飲食天數(shù)增加,比目魚肌Na,K-ATP酶活性降低。 6 D組比目魚肌Na,K-ATP酶α1亞型表達較A組無統(tǒng)計學(xué)差異,F組相對A組降低(P0.05),D組α2亞型表達相對A組降低(P0.05),F組相對A組顯著降低。 結(jié)論:低鉀飲食可造成比目魚肌組織內(nèi)鉀離子含量降低,比目魚肌組織內(nèi)鈉離子顯著增高,鎂離子含量降低。比目魚肌Na,K-ATP酶活性隨血漿鉀離子下降而下降,低鉀飲食期間比目魚肌Na,K-ATP酶α_1亞型表達有降低趨勢,α_2亞型表達隨著血漿鉀的降低而降低。
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【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R-332

【參考文獻】

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本文編號：2418860