發(fā)布時(shí)間：2018-11-26 20:21

【摘要】：膜聯(lián)蛋白A2是一種參與調(diào)節(jié)多種病毒增殖的重要宿主蛋白。本研究通過構(gòu)建過表達(dá)膜聯(lián)蛋白A2的BHKAnxa2細(xì)胞系及瞬時(shí)敲低膜聯(lián)蛋白A2,探討膜聯(lián)蛋白A2對腦心肌炎病毒在BHK-21細(xì)胞中增殖的影響。通過RT-PCR從BHK-21細(xì)胞中擴(kuò)增膜聯(lián)蛋白A2全長cDNA,測序正確后克隆入pcDNA3.1整合表達(dá)載體中;用重組載體pcDNA3.1-Anxa2轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞,經(jīng)G418篩選獲得抗性克隆,qRT-PCR和Western blot試驗(yàn)證明BHKAnxa2過表達(dá)膜聯(lián)蛋白A2;EMCV感染試驗(yàn)證明BHK-Anxa2細(xì)胞中病毒滴度高于對照組。通過siRNA降低BHK-21細(xì)胞中膜聯(lián)蛋白A2表達(dá),EMCV感染試驗(yàn)證明膜聯(lián)蛋白A2表達(dá)下降后EMCV增殖也隨之下降。以上試驗(yàn)結(jié)果表明鼠膜聯(lián)蛋白A2表達(dá)改變可導(dǎo)致病毒在BHK-21細(xì)胞中的增殖發(fā)生變化,提示膜聯(lián)蛋白A2與EMCV在BHK-21細(xì)胞中的增殖相關(guān)。
[Abstract]:Annexin A2 is an important host protein involved in regulating the proliferation of many viruses. The aim of this study was to investigate the effect of BHKAnxa2 cell line and transient knockout A2 on the proliferation of encephalitis virus in BHK-21 cells. The full length cDNA, of annexin A2 was amplified by RT-PCR from BHK-21 cells and cloned into pcDNA3.1 integrative expression vector. The recombinant vector pcDNA3.1-Anxa2 was used to transfect BHK-21 cells, and the resistant clones were obtained by G418 screening. QRT-PCR and Western blot tests showed that the viral titer of BHK-Anxa2 cells was higher than that of the control group. The results of qRT-PCR and Western blot showed that the viral titer of BHK-Anxa2 cells was higher than that of the control group. The expression of annexin A2 in BHK-21 cells was decreased by siRNA, and the EMCV proliferation was also decreased after the decrease of EMCV expression by EMCV infection assay. These results suggest that the expression of rat integrin A2 may lead to the proliferation of the virus in BHK-21 cells, suggesting that there is a correlation between the proliferation of EMCV and the proliferation of integrin A2 in BHK-21 cells.
【作者單位】： 甘肅省動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)研究中心;西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院;西北民族大學(xué)生物工程與技術(shù)國家民委重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(項(xiàng)目號:31460665),題目:腦心肌炎病毒受體的篩選、鑒定及功能分析 教育部“長江學(xué)者和創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)發(fā)展計(jì)劃”(項(xiàng)目號:IRT13091) 中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金(項(xiàng)目號:31920150025),題目:膜聯(lián)蛋白 A2調(diào)節(jié)腦心肌炎病毒感染的作用和機(jī)制研究。
【分類號】：R373

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本文編號：2359532