【摘要】：目的觀察堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(b FGF)對(duì)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)向成骨細(xì)胞分化的影響,并探討其最佳作用濃度。方法采用體外全血貼壁法培養(yǎng)兔BMSCs,進(jìn)行表面抗原(CD29、CD44、CD45,采用流式細(xì)胞術(shù))及成軟骨(HE染色和阿爾新藍(lán)染色)、成骨[茜素紅染色及堿性磷酸酶(ALP)染色]分化潛能鑒定。取第2代BMSCs,加入含0、1、5、10、50、100 ng/m L b FGF的成骨誘導(dǎo)液,分別于培養(yǎng)第4、7、10、14天采用PNP比色法檢測(cè)ALP表達(dá),采用放射免疫分析法檢測(cè)骨鈣素(OC)表達(dá)。結(jié)果細(xì)胞表面抗原CD29陽(yáng)性表達(dá)率為92.23%,CD44陽(yáng)性表達(dá)率為80.01%,CD45陽(yáng)性表達(dá)率為1.91%;HE染色見(jiàn)細(xì)胞形態(tài)為多角形或多邊形,有多個(gè)凸起,核周細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)黑色顆粒,阿爾新藍(lán)染色可見(jiàn)細(xì)胞間大量天藍(lán)色物質(zhì)彌漫分布;茜素紅染色可見(jiàn)大量紅色鈣結(jié)節(jié),ALP染色可見(jiàn)細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕褐色的顆粒和塊狀沉淀;證實(shí)分離培養(yǎng)的細(xì)胞為BMSCs,并具有成軟骨和成骨分化潛能。隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng),BMSCs經(jīng)不同濃度b FGF作用后ALP及OC表達(dá)均呈升高趨勢(shì)。相同作用時(shí)間下,BMSCs經(jīng)50 ng/m L b FGF作用后ALP及OC表達(dá)均高于0、1、5、10、100 ng/m L b FGF作用后(P均0.01)。結(jié)論 b FGF能促進(jìn)BMSCs向成骨細(xì)胞分化,并呈時(shí)間依賴(lài)性;其最佳作用濃度為50 ng/m L。
[Abstract]:Objective to observe the effect of basic fibroblast growth factor (b FGF) on the differentiation of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) into osteoblasts by (BMSCs), and to explore the optimal concentration of BFGF. Methods Rabbit BMSCs, was cultured with whole blood adherent method in vitro for surface antigen (CD29,CD44,CD45,) and cartilage (HE staining and new blue staining). The differentiation potential of osteogenesis [alizarin red staining and alkaline phosphatase (ALP) staining] was identified. The second generation of BMSCs, was added into the osteogenic inducer containing 0 1, 1, 5, 10, 10, 50 ng/m L b FGF. The expression of ALP was detected by PNP colorimetry on the 4th day of culture, and the expression of osteocalcin (OC) was detected by radioimmunoassay (RIA). The expression of osteocalcin (OC) was detected by radioimmunoassay (RIA). Results the positive expression rate of cell surface antigen CD29 was 92.23 and the positive rate of CD44 was 80.01 and the positive rate of CD45 was 1.91. HE staining showed that the cells were polygonal or polygonal, with multiple bulges, black particles could be seen in the cytoplasm around the nucleus, and a large number of sky blue substances were diffuse in the cells. Alizarin red staining showed a large number of red calcium nodules, and ALP staining showed brown granules and massive precipitates in the cytoplasm, which confirmed that the isolated and cultured cells were BMSCs, and had the potential of cartilage formation and osteogenic differentiation. The expression of ALP and OC in BMSCs treated with different concentrations of b FGF increased with the prolongation of time. At the same time, the expression of ALP and OC in BMSCs treated with 50 ng/m L b FGF was significantly higher than that after treatment with 10 100 ng/m L b FGF (P 0.01). Conclusion b FGF can promote the differentiation of BMSCs into osteoblasts in a time dependent manner, and its optimal concentration is 50 ng/m / L.
【作者單位】： 廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院;
【基金】：廣西中醫(yī)藥民族醫(yī)藥自籌經(jīng)費(fèi)科研課題(GZZC15-33)
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2

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本文編號(hào)：2346850