【摘要】：粒細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor, G-CSF)是由單核巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等產(chǎn)生的一種造血生長(zhǎng)因子,與細(xì)胞表面的特定受體G-CSFR (CD114)結(jié)合,促進(jìn)中性粒細(xì)胞系造血祖細(xì)胞生長(zhǎng)和分化,保護(hù)中性粒細(xì)胞避免凋亡并加強(qiáng)它們的功能,成為防治由各種原因引起的粒細(xì)胞減少癥的有效藥物。近十年來,G-CSF在臨床上應(yīng)用于骨髓移植患者,動(dòng)員捐贈(zèng)者骨髓中造血干細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞到受者外周血中,實(shí)現(xiàn)了外周血造血干細(xì)胞的移植。目前研究發(fā)現(xiàn),G-CSF可以通過血腦屏障,具有中樞神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)作用,大大擴(kuò)展了G-CSF的臨床應(yīng)用。 對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的組織給予G-CSF治療能夠在損傷區(qū)域內(nèi)誘導(dǎo)新的神經(jīng)和血管形成,降低組織損害,減少梗死體積和提高神經(jīng)功能。本實(shí)驗(yàn)室課題組用G-CSF動(dòng)員神經(jīng)干細(xì)胞治療小鼠的缺血缺氧性腦損傷,而且,G-CSF能夠促進(jìn)SVZ和DG等區(qū)內(nèi)源性NSCs的增殖,這將為G-CSF治療神經(jīng)損傷相關(guān)疾病的臨床應(yīng)用提供新的思路。 脊髓損傷是一種嚴(yán)重危害生命健康的疾病,關(guān)于脊髓損傷的研究數(shù)不勝數(shù)。小膠質(zhì)細(xì)胞(microglia, MG)作為神經(jīng)系統(tǒng)具有代表性的免疫細(xì)胞,廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng),對(duì)神經(jīng)元起著支持、營(yíng)養(yǎng)、保護(hù)及修復(fù)等重要作用。小膠質(zhì)細(xì)胞猶如一把“雙刃劍”在神經(jīng)系統(tǒng)損傷、疾病等病理狀態(tài)下具有不同的形態(tài)功能和免疫活性,能夠發(fā)揮保護(hù)和破壞雙重作用。Gordon S根據(jù)巨噬細(xì)胞激活的信號(hào)通路不同將其分為兩型：經(jīng)典激活型(M1型)和選擇激活型(M2型),兩型細(xì)胞具有不同的免疫學(xué)表型和功能。M1型細(xì)胞通過分泌不同的細(xì)胞因子促進(jìn)炎癥的發(fā)生、抑制腫瘤的形成。M2型吞噬功能活躍、抑制炎癥反應(yīng)、促進(jìn)組織再生修復(fù)。因此,積極研究小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)脊髓損傷的保護(hù)作用,抑制其損害作用,對(duì)脊髓損傷的修復(fù)有著重要意義。本研究主要觀察在脊髓損傷模型中G-CSF對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞M1神經(jīng)損傷型/M2神經(jīng)保護(hù)型雙重角色轉(zhuǎn)化的影響,并初步探討G-CSF對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞可能的作用機(jī)制。 第一部分G-CSF對(duì)小鼠脊髓損傷后運(yùn)動(dòng)能力的恢復(fù)及體內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞激活及分布的影響 首先建立小鼠脊髓右側(cè)半切損傷模型,造模成功術(shù)后給予粒細(xì)胞集落刺激因子,連續(xù)3d,進(jìn)行Basso-Beattie-Bresnahan (BBB)評(píng)分,評(píng)價(jià)小鼠運(yùn)動(dòng)功能。取脊髓切片進(jìn)行免疫熒光染色檢測(cè)G-CSFR在小膠質(zhì)細(xì)胞上的表達(dá)、小膠質(zhì)細(xì)胞激活、募集數(shù)目和形態(tài)的變化以及灰白質(zhì)內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞分布的差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,G-CSF可以促進(jìn)小鼠運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù),并激活小膠質(zhì)細(xì)胞,促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞向損傷處募集。 第二部分G-CSF對(duì)體外脊髓損傷條件下小膠質(zhì)細(xì)胞的影響 免疫熒光染色和RT-PCR技術(shù)檢測(cè)BV2小膠質(zhì)細(xì)胞膜上G-CSFR的表達(dá)。MTT檢測(cè)G-CSF對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞活性的影響。利用損傷脊髓的組織上清液模擬體外脊髓損傷環(huán)境,檢測(cè)應(yīng)用G-CSF后M1型/M2型小膠質(zhì)細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá),以及炎癥細(xì)胞因子的mRNA水平。Western blotting檢測(cè)應(yīng)用G-CSF后小膠質(zhì)細(xì)胞NF-кB信號(hào)通路p65的活性及stat3、p-stat3表達(dá)量的改變。G-CSF可以調(diào)節(jié)體外小膠質(zhì)細(xì)胞M1型/M2型基因的表達(dá),治療組M1型mRNA表達(dá)量較損傷組降低,G-CSF促進(jìn)M2型mRNA表達(dá),并延長(zhǎng)其存在時(shí)間。G-CSF治療后IL-1β、TNFα、iNOS mRNA水平明顯降低,抗炎因子TGFβ、IL-10mRNA表達(dá)水平上升。G-CSF通過下調(diào)小膠質(zhì)細(xì)胞NF-кB信號(hào)通路p65的活性及促進(jìn)stat3磷酸化發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,G-CSF可以調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞的極化過程,并調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞分泌炎癥因子發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。 總之,通過本研究我們發(fā)現(xiàn),G-CSF可以調(diào)節(jié)體內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞的激活促進(jìn)運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù),而且可以調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞極化過程和細(xì)胞因子的分泌從而使其發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R-332;R651.2

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本文編號(hào)：2346628