【摘要】：目的評價結(jié)核分枝桿菌蛋白抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868的血清診斷價值和潛在應(yīng)用前景。方法以結(jié)核分枝桿菌H37Rv標(biāo)準(zhǔn)株全基因組DNA為模板擴(kuò)增得到Rv2654c、Rv1985c和Rv3868基因的完整序列,并與表達(dá)載體p ET-32a構(gòu)建重組質(zhì)粒。原核表達(dá)Rv2654c、Rv1985c和Rv3868蛋白,利用親和層析的方法進(jìn)行純化。采用棋盤滴定的方法,確定各抗原的酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)最佳反應(yīng)條件,并應(yīng)用190份血清進(jìn)行血清Ig G抗體檢測,結(jié)合受試者工作特征曲線(ROC)對其診斷效能進(jìn)行分析和評價。通過ROC計算各抗原組合的診斷效能,確定最佳組合方案。結(jié)果成功構(gòu)建了重組蛋白,對重組后的片段進(jìn)行測序,經(jīng)BLAST比對與目的基因完全一致,且能夠穩(wěn)定表達(dá)。對經(jīng)純化后的3種蛋白進(jìn)行ELISA檢測,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析,Rv2654c、Rv1985c和Rv3868抗原的診斷效能分別達(dá)到73.16%、56.84%和71.05%。結(jié)合ROC得到最佳的抗原組合方案為Rv2654c+Rv3868,其敏感性、特異性和診斷效能分別達(dá)到78.95%、72.63%和75.79%。結(jié)論結(jié)核分枝桿菌重組抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868具有作為結(jié)核病診斷抗原的潛力,可以作為結(jié)核病免疫學(xué)快速診斷的候選蛋白�？乖M合Rv2654c+Rv3868具有較高的診斷效能,有較好的潛在應(yīng)用價值。
[Abstract]:Objective to evaluate the diagnostic value and potential application of Mycobacterium tuberculosis protein antigen Rv2654c,Rv1985c and Rv3868 in serum. Methods the complete sequences of Rv2654c,Rv1985c and Rv3868 genes were amplified from the whole genomic DNA of Mycobacterium tuberculosis H37Rv standard strain, and the recombinant plasmid was constructed with the expression vector p ET-32a. Rv2654c,Rv1985c and Rv3868 proteins were expressed in prokaryotic cells and purified by affinity chromatography. The optimal reaction conditions of (ELISA) for each antigen were determined by chessboard titration. Serum Ig G antibody was detected in 190 sera. The diagnostic efficacy was analyzed and evaluated with (ROC) of operating characteristic curve. The diagnostic efficiency of each antigen combination was calculated by ROC, and the optimal combination scheme was determined. Results the recombinant protein was successfully constructed and the recombinant fragment was sequenced. The recombinant protein was completely consistent with the target gene by BLAST comparison and could be expressed stably. ELISA analysis showed that the diagnostic efficacy of Rv2654c,Rv1985c and Rv3868 antigens were 73.1656.84% and 71.05%, respectively. The best antigen combination regimen combined with ROC was Rv2654c Rv3868, its sensitivity, specificity and diagnostic efficacy were 72.63% and 75.79%, respectively. Conclusion Mycobacterium tuberculosis recombinant antigens Rv2654c,Rv1985c and Rv3868 have potential as diagnostic antigens for tuberculosis and can be used as candidate proteins for rapid diagnosis of tuberculosis. Antigenic combination Rv2654c Rv3868 has high diagnostic efficacy and potential application value.
【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學(xué)檢驗醫(yī)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院;中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所傳染病預(yù)防控制國家重點實驗室;
【基金】：國家科技重大專項(No.2013ZX10003006-002-001)~~
【分類號】：R378.911

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