【摘要】：目的：骨髓間充質(zhì)干細胞目前已經(jīng)成為重要的組織工程種子細胞,而若想深入研究MSCs在體內(nèi)外增殖、分化的規(guī)律首先需要解決如何能高效、安全地標記MSCs問題。本文通過觀察SPIO及DAPI對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的雙標記效果及其對細胞存活、增殖以及凋亡的影響,為間充質(zhì)干細胞的活體示蹤研究奠定基礎(chǔ)。 方法：分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞,用SPIO及DAPI雙標記后分別用普魯士藍染色法和激光共聚焦顯微鏡觀察其鐵標記率及熒光標記率。用臺盼藍檢測細胞活力；MTT法檢測標記干細胞增值力；Calcein-AM/PI以及AO/PI雙染細胞,檢測細胞存活率以及凋亡率。 結(jié)果：SPIO及DAPI在體外雙標記大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞效率高,幾乎達100%;臺盼藍染色顯示標記細胞的存活率為97%；MTT法檢測發(fā)現(xiàn)雙標記干細胞組的活力以及增殖力與未標記干細胞組相比差異均無顯著性意義(P0.05)；Calcein-AM/PI染色,未標記細胞及雙標記細胞的存活率分別為96%和95%；AO/PI染色,未標記及雙標記細胞的凋亡率均為1%。 結(jié)論：超順磁性氧化鐵和DAPI雙標記大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞后,對于干細胞的存活、增殖以及凋亡無影響。
[Abstract]:Objective: bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) have become important seed cells for tissue engineering. In order to study the proliferation of MSCs in vivo and in vitro, it is necessary to solve the problem of how to label MSCs efficiently and safely. The effects of SPIO and DAPI on the double labeling of rat bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) and their effects on cell survival, proliferation and apoptosis were observed in order to lay a foundation for the in vivo tracer study of mesenchymal stem cells (MSCs). Methods: rat bone marrow mesenchymal stem cells were isolated and cultured. After double labeling with SPIO and DAPI, the iron-labeling rate and fluorescence labeling rate were observed by Prussian blue staining and laser confocal microscopy, respectively. Trypan blue assay was used to detect the viability of the cells. The cell viability and apoptosis rate were detected by MTT assay. The cells were labeled with Calcein-AMP / Pi and AO/PI double staining. Results the double labeled rat bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) were highly efficient in vitro, almost 100% by trypan blue staining, and 97% by trypan blue staining. MTT assay showed that there was no significant difference in activity and proliferative power between double labeled stem cell group and unlabeled stem cell group (P0.05). The survival rates of unlabeled cells and double labeled stem cells were 96% and 95% respectively. The apoptotic rate of unlabeled and double labeled cells was 1%. Conclusion: superparamagnetic ferric oxide and DAPI double labeled rat bone marrow mesenchymal stem cells have no effect on the survival, proliferation and apoptosis of stem cells.
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R329

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本文編號：2256302