【摘要】：[目的]構(gòu)建帶his標(biāo)簽的人p52Shc1基因真核表達(dá)載體,并根據(jù)其生物學(xué)活性進(jìn)行鑒定。[方法]采用PCR技術(shù)以Shc1 cDNA基因?yàn)槟０鍞U(kuò)增Shc1基因,將其插入pEnter載體構(gòu)建pEnter-p52shc1重組質(zhì)粒,將重組質(zhì)粒與空載體分別轉(zhuǎn)入293T細(xì)胞,利用Western Blot檢測p52Shc1表達(dá)情況,并使用cck-8法繪制細(xì)胞生長曲線。[結(jié)果]通過雙酶切獲得2條與目的基因大小相符的片段,測序結(jié)果顯示符合率為100%,Western Blot結(jié)果顯示在52 kDa大小處出現(xiàn)清晰單一條帶,cck-8法繪制的細(xì)胞生長曲線顯示,轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒pEnter-p52Shc1的細(xì)胞生長速率明顯大于轉(zhuǎn)染pEnter空載的細(xì)胞(P0.01)。[結(jié)論]成功構(gòu)建帶his標(biāo)簽的人p52Shc1基因真核表達(dá)載體并在293T細(xì)胞中成功表達(dá),轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒并表達(dá)p52Shc1蛋白的293T細(xì)胞的增值速率明顯提高。
[Abstract]:[objective] to construct the eukaryotic expression vector of human p52Shc1 gene with his tag and to identify its biological activity. [methods] the Shc1 gene was amplified by PCR and inserted into pEnter vector to construct pEnter-p52shc1 recombinant plasmid. The recombinant plasmid and empty vector were transferred into 293T cells respectively. P52Shc1 expression was detected by Western Blot. Cck-8 method was used to draw cell growth curve. [results] two fragments were obtained by double enzyme digestion. The result of sequencing showed that the coincidence rate was 100%. The results of Western Blot showed that there was a clear cell growth curve drawn by single band cck-8 method at the size of 52 kDa. The growth rate of cells transfected with recombinant plasmid pEnter-p52Shc1 was significantly higher than that without pEnter transfection (P0.01). [conclusion] the eukaryotic expression vector of human p52Shc1 gene with his tag was successfully constructed and expressed in 293T cells. The proliferation rate of 293T cells transfected with recombinant plasmid and expressed p52Shc1 protein was significantly increased.
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)與生物技術(shù)學(xué)院抗體工程研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(“羊口瘡病毒ORFV118蛋白調(diào)控宿主細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制研究”,No.31672536) 廣州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(“產(chǎn)前快速診斷自動(dòng)化設(shè)備及其創(chuàng)新型試劑的開發(fā)”,No.201604010046;“系列全自動(dòng)管式化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒及配套設(shè)備的產(chǎn)業(yè)化”,No.201604040003)
【分類號】：R3416

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本文編號：2256095