【摘要】：人類免疫缺陷病毒(HIV)感染人類所導(dǎo)致的獲得性免疫缺陷綜合征(Acquired Immunodeficiency Syndrome,即AIDS)已經(jīng)在全球范圍內(nèi)流行了30余年,但是迄今為止尚未找到能夠徹底清除病毒感染并治愈AIDS的方法。本課題組主要致力于治療性艾滋病疫苗(Therapeutic HIV vaccine)的研究,導(dǎo)師曾毅院士在國(guó)內(nèi)外首次提出HIV多載體疫苗序貫重復(fù)免疫的策略,并在小鼠及恒河猴實(shí)驗(yàn)中證實(shí)該策略能誘導(dǎo)較強(qiáng)而且持久的HIV特異性細(xì)胞免疫反應(yīng),提示該策略有很好的應(yīng)用前景。另外,基于樹突狀細(xì)胞(Dendritic Cells,DCs)的HIV疫苗在臨床前和臨床研究中都顯示可有效控制病毒載量,我們擬在多載體疫苗序貫重復(fù)免疫的策略中增加這種DCs疫苗的應(yīng)用。本研究目的是在前期研究的基礎(chǔ)上,構(gòu)建新的表達(dá)不同亞型基因候選艾滋病疫苗并進(jìn)行免疫原性評(píng)價(jià);同時(shí)也對(duì)負(fù)載Ad5-HIVgag/env的DC疫苗進(jìn)行免疫原性評(píng)價(jià)為后期進(jìn)一步進(jìn)行包括上述各種疫苗在內(nèi)的多載體疫苗聯(lián)合免疫方案的優(yōu)化奠定基礎(chǔ)。本研究主要包括三部分,首先對(duì)表達(dá)HIV-1 CRF01_AE亞型gp145和gp160基因的DNA疫苗在小鼠體內(nèi)的免疫原性進(jìn)行了比較,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,表達(dá)gp145和gp160基因的DNA疫苗都能夠誘導(dǎo)抗原特異性免疫反應(yīng),反應(yīng)峰值分別出現(xiàn)在免疫后3w和4w,表達(dá)gp145基因的DNA疫苗免疫后誘導(dǎo)的HIV特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)更快達(dá)到峰值,pVR-AE gp145在小鼠體內(nèi)的免疫原性明顯優(yōu)于pVR-AE gp160,在后續(xù)研究中將選擇pVR-AE gp145疫苗與其他載體疫苗進(jìn)行聯(lián)合免疫的進(jìn)一步評(píng)價(jià)。其次,構(gòu)建了表達(dá)HIV-1 B/C亞型gag基因的重組腺病毒疫苗(rAd5-HIV B/C gag),并對(duì)其在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)進(jìn)行了初步研究。ELISPOT結(jié)果顯示,rAd5-HIV B/C gag免疫2周后,在小鼠內(nèi)檢測(cè)到了高水平的Gag特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答。此外,還在小鼠體內(nèi)評(píng)價(jià)了負(fù)載Ad5-HIV gag/env的DCs疫苗的免疫原性。首先用貼壁法分離純化BALB/c小鼠DCs,并通過(guò)細(xì)胞因子誘導(dǎo)DC細(xì)胞成熟后,采用流式細(xì)胞術(shù)鑒定DC純度。利用重組腺病毒Ad5-HIV gag/env感染DC細(xì)胞,制備DC疫苗,并用所制備的DC疫苗單獨(dú)或聯(lián)合免疫小鼠,在免疫后的不同時(shí)間點(diǎn),用ELISPOT方法檢測(cè)小鼠體內(nèi)HIV特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答強(qiáng)度。結(jié)果顯示,Ad5-HIV gag/env負(fù)載的樹突狀細(xì)胞疫苗可以在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)較強(qiáng)的HIV特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)。上述的DNA疫苗,Ad5疫苗和負(fù)載Ad5-HIVgag/env的DC疫苗都有很好的免疫原性,為進(jìn)一步評(píng)價(jià)這些疫苗在小鼠體內(nèi)序貫、重復(fù)免疫的效果奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) caused by human immunodeficiency virus (HIV) infection has been prevalent in the world for more than 30 years, but no method has been found to completely eliminate the virus infection and cure AIDS. Our research group is mainly devoted to the research of therapeutic AIDS vaccine (Therapeutic HIV vaccine). Academician Zeng Yi proposed the strategy of sequential repeated immunization of HIV multi-carrier vaccine for the first time at home and abroad. The results of experiments in mice and rhesus monkey showed that the strategy could induce strong and persistent HIV specific cellular immune response, which indicated that the strategy had a good application prospect. In addition, HIV vaccine based on dendritic cells (Dendritic Cells,DCs) has been shown to be effective in controlling viral load in both clinical and clinical studies. We intend to increase the application of this DCs vaccine in the strategy of sequential repeated immunization of multi-vector vaccines. The aim of this study was to construct a new candidate AIDS vaccine expressing different subtypes of genes and evaluate its immunogenicity on the basis of previous studies. At the same time, the immunogenicity evaluation of the DC vaccine loaded with Ad5-HIVgag/env laid the foundation for further optimization of the multi-vector vaccine combined immunization scheme, including the above-mentioned vaccines. This study mainly consists of three parts. Firstly, the immunogenicity of the DNA vaccine expressing HIV-1 CRF01_AE subtype gp145 and gp160 gene in mice was compared. Both DNA vaccines expressing gp145 and gp160 genes can induce antigen-specific immune responses. The peak value of the response occurred at 3w and 4ws after immunization, respectively. The immunogenicity of HIV specific cellular immune response induced by DNA vaccine expressing gp145 gene was faster than that of pVR-AE gp160, in mice after immunization. The immunogenicity of pVR-AE gp145 in mice was significantly better than that of pVR-AE gp160, in the follow-up study. PVR-AE gp145 vaccine and other vector vaccines will be selected for further evaluation of combined immunization. Secondly, the recombinant adenovirus vaccine (rAd5-HIV B / C gag),) expressing HIV-1 B / C subtype gag gene was constructed and the immune response induced by rAd5-HIV B / C gag), in mice was studied. The results showed that rAd5-HIV B / C gag was immunized for 2 weeks. A high level of Gag specific cellular immune response was detected in mice. In addition, immunogenicity of DCs vaccine loaded with Ad5-HIV gag/env was evaluated in mice. The DCs, of BALB/c mice was isolated and purified by adherent method. After the DC cells matured by cytokines, the purity of DC was identified by flow cytometry. The recombinant adenovirus Ad5-HIV gag/env was used to infect DC cells to prepare DC vaccine. Mice were immunized with the DC vaccine alone or in combination. The specific cellular immune response of HIV in mice was detected by ELISPOT method at different time points after immunization. The results showed that the dendritic cell vaccine loaded with Ad5-HIV gag/env could induce a strong HIV specific cellular immune response in mice. The above DNA vaccine, Ad5 vaccine, and DC vaccine loaded with Ad5-HIVgag/env have good immunogenicity, which lays a foundation for further evaluation of the sequential and repeated immunization effect of these vaccines in mice.
【學(xué)位授予單位】：北京工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R392

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張振國(guó),周艷春;麻疹疫苗免疫效果影響因素研究[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2001年24期

2 孫美平,范晨陽(yáng),付建平;新疫苗管理原則與使用實(shí)踐[J];中國(guó)計(jì)劃免疫;2001年06期

3 楊旭;張勇;張劍;徐燕;;淮北地區(qū)禽流感疫苗免疫效果的調(diào)查[J];安徽農(nóng)學(xué)通報(bào);2007年17期

4 趙瑋;楊俊;;疫苗免疫效果的影響因素[J];中國(guó)家禽;2010年12期

5 陳遠(yuǎn)銀,趙鞠玲;煙臺(tái)市部分人群風(fēng)疹疫苗免疫效果調(diào)查[J];中國(guó)計(jì)劃免疫;1999年02期

6 楊晶,王憬惺;新型Ⅰ型人類免疫缺陷病毒疫苗[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).輸血及血液學(xué)分冊(cè);2004年01期

7 李杰;;淺談疫苗工作的重要性[J];醫(yī)學(xué)信息(中旬刊);2010年10期

8 柯建厚;珠海市兒童三種疫苗免疫效果調(diào)查[J];廣東衛(wèi)生防疫;1998年03期

9 梁勇;麻疹疫苗免疫效果的影響因素[J];中國(guó)計(jì)劃免疫;1999年01期

10 劉建福,李恒英,朱玉玲,王洛敬,劉景偉;莒南縣乙腦發(fā)病與疫苗免疫效果分析[J];預(yù)防醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)信息;1996年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 賀英;趙萍;儲(chǔ)岳峰;高鵬程;張建軍;逯忠新;;豬傳染性胸膜肺炎疫苗的研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第三屆豬病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

2 林綺萍;唐秀英;陳瑞愛;朱文冠;黃文科;李琳;劉成宏;;不同廠家生產(chǎn)的雞傳染性支氣管炎三聯(lián)滅活疫苗免疫效果比較[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國(guó)免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第七次研討會(huì)論文集[C];2008年

3 康友敏;金華利;張曉瑩;解啟發(fā);尹江梅;于揚(yáng);王賓;;左旋咪唑增強(qiáng)傳統(tǒng)疫苗免疫效果的研究[A];中國(guó)生物工程學(xué)會(huì)第四次會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2005年

4 董曉春;;天津市成人流感疫苗免疫效果回顧性評(píng)價(jià)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第一屆全國(guó)公共衛(wèi)生學(xué)術(shù)會(huì)議暨第四屆中國(guó)現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)培訓(xùn)項(xiàng)目匯編[C];2009年

5 尹江梅;王賓;;雞新城疫新型佐劑疫苗免疫效果的研究[A];中國(guó)生物工程學(xué)會(huì)第四次會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2005年

6 陳仕珠;姚茹;溫鳳玲;韓永戰(zhàn);;0、7、14天程序接種對(duì)50歲以上人群乙肝免疫的效果[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

7 尹衛(wèi)東;;突發(fā)傳染病流行給疫苗企業(yè)帶來(lái)的機(jī)遇與挑戰(zhàn)[A];中國(guó)制藥發(fā)展高層論壇（科技篇）暨2006年全國(guó)醫(yī)藥工業(yè)技術(shù)工作年會(huì)專輯[C];2006年

8 馬鳳龍;李濤;傅興倫;喬彥良;李春榮;朱連勤;劉煥珍;;重組γ-干擾素對(duì)HCV、PRRSV、PRV疫苗免疫效果的影響[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第三屆豬病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

9 張彥凱;袁勝濤;嚴(yán)榮;張陸勇;吳潔;;免佐劑抗人絨毛膜促性腺激素疫苗的構(gòu)建及其抗腫瘤作用研究[A];2007醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十屆全國(guó)腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

10 馮曉燕;王國(guó)華;宋曉國(guó);陳X;修冰水;何競(jìng);楊錫琴;朱翠俠;張賀秋;;狂犬病毒表位區(qū)段抗原在疫苗免疫效果評(píng)價(jià)中的應(yīng)用價(jià)值[A];第五次全國(guó)免疫診斷暨疫苗學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2011年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前8條

1 山東省農(nóng)科院 秦卓明 王友令;采用的疫苗一定要種屬專用[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2007年

2 本報(bào)記者 章勇;發(fā)展牛羊用疫苗 潛力有多大[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2014年

3 本報(bào)記者　 賴強(qiáng);兩支疫苗的故事[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

4 記者 鄭靈巧;國(guó)產(chǎn)“甲流”疫苗免疫效果好[N];健康報(bào);2009年

5 李岳;狂犬病免疫失敗原因何在[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2004年

6 楊玲玲;接種疫苗遠(yuǎn)離流感[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

7 ;疫苗防宮頸癌循證醫(yī)學(xué)證據(jù)尚不充分[N];健康報(bào);2009年

8 陜西省長(zhǎng)安縣畜牧獸醫(yī)中心站 每小平;影響雞免疫效果主要因素[N];中國(guó)畜牧水產(chǎn)報(bào);2001年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 余大海;結(jié)核桿菌和布魯氏桿菌多價(jià)DNA疫苗的研究[D];北京大學(xué);2008年

2 任慧英;豬繁殖與呼吸綜合征病毒DNA疫苗的研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

3 劉善奎;DNA疫苗微球給藥系統(tǒng)的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

4 田苗;MAGE-4與熱休克蛋白70融合DNA疫苗的構(gòu)建及體內(nèi)抑瘤效應(yīng)的研究[D];吉林大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 白潔;禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒及雞傳染性法氏囊病活疫苗對(duì)禽流感疫苗免疫效果的影響[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 劉超;表達(dá)HIV基因的DNA、Ad5及DC疫苗在小鼠體內(nèi)的免疫原性研究[D];北京工業(yè)大學(xué);2016年

3 張恒慧;抗仔豬腹瀉多價(jià)腸毒素及菌毛復(fù)合疫苗的研制[D];大連理工大學(xué);2013年

4 肖賢;豬圓環(huán)病毒Ⅱ型疫苗規(guī)�；i場(chǎng)應(yīng)用比較研究[D];上海交通大學(xué);2013年

5 潘芹芹;促黃體素釋放激素單克隆抗體的研制及去勢(shì)疫苗相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

6 劉金朋;豬圓環(huán)病毒Ⅱ型ORF2基因DNA疫苗的構(gòu)建與鼠體內(nèi)免疫效力觀察[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 劉平;基于TEM-8新型顆粒性疫苗的構(gòu)建、鑒定及其抗腫瘤免疫的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

8 汪洪冰;湖南省豬繁殖與呼吸綜合征疫苗（JXAI-R株）臨床效果評(píng)估[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

9 陳萍;間接ELISA檢測(cè)IBV DNA疫苗免疫抗體及IBV M基因表達(dá)研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

10 王晉;人乳頭瘤病毒11型L1蛋白的突變分析及其類病毒顆粒疫苗的研制[D];廈門大學(xué);2007年

，

本文編號(hào)：2244066