【摘要】：目的：探索脂肪干細(xì)胞(adipose-derived cells,ADSCs)治療促進(jìn)組織血管化的治療機(jī)理，為細(xì)胞治療的臨床轉(zhuǎn)化研究提供理論基礎(chǔ)。 方法：1、ADSCs的分離培養(yǎng)與鑒定 在無菌條件下，取出wistar大鼠腹股溝脂肪墊，用氯霉素沖洗，于膠原酶中振蕩消化，低速離心，細(xì)胞篩網(wǎng)過濾后接種于培養(yǎng)皿，獲得原代ADSCs。 取第三代ADSCs用成軟骨、成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)液誘導(dǎo)培養(yǎng)，，分別行Ⅱ型膠原染色及油紅O染色鑒定。 2、建立裸鼠隨意皮瓣模型 在裸鼠背部掀起1cm×2.5cm大小隨意皮瓣，于皮瓣肉膜面分別注射約1×107個(gè)已標(biāo)記CM-Dil的ADSCs0.2ml混懸液(實(shí)驗(yàn)組)及等體積的PBS(對照組)。 3、血管化細(xì)胞因子水平分析 3、1將植入的ADSCs與裸鼠自身的細(xì)胞分選出 上述動物模型一部分分別在術(shù)后第1、3、7天取材，將皮瓣組織于無菌條件下取出并剪碎，用0.2%的膠原酶于37℃振蕩消化1h后，用等體積含10%胎牛血清DMEM液中止消化，離心后用2%FBS重懸，用流式細(xì)胞儀將DiL標(biāo)記的陽性細(xì)胞與裸鼠自身的陰性細(xì)胞分選出。 3、2分選后的細(xì)胞提RNA行VEGF、bFGF及HIF-1α的定量PCR分析。 結(jié)果：1、大鼠ADSCs貼壁后呈成纖維細(xì)胞樣形態(tài)。第三代ADSCs經(jīng)成脂、成軟骨誘導(dǎo)分化后，染色結(jié)果均為陽性。 2、ADSCs治療組皮瓣成活率顯著高于對照組，p0.001，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 3、流式細(xì)胞分選結(jié)果提示，在細(xì)胞治療后第1、3、7天，植入的細(xì)胞數(shù)量（帶熒光標(biāo)記的陽性細(xì)胞）呈明顯下降趨勢。 4、定量PCR結(jié)果提示：經(jīng)細(xì)胞治療干預(yù)的皮瓣組織，其HIF-1α及其下游分子的表達(dá)水平較對照組高，且隨時(shí)間推移有增加趨勢。 結(jié)論：促進(jìn)損傷組織血管化的細(xì)胞因子來源于裸鼠自身，而并非植入的ADSCs所分泌。證實(shí)了細(xì)胞的植入其實(shí)是通過上調(diào)組織自身的血管化因子水平，來間接促進(jìn)組織血管新生的。
[Abstract]:Aim: to explore the therapeutic mechanism of adipose stem cell (adipose-derived cells,ADSCs) therapy to promote tissue vascularization and to provide a theoretical basis for clinical transformation of cell therapy. Methods the isolation, culture and identification of wistar rat inguinal fat pad were carried out under aseptic condition, then washed with chloramphenicol, digested in collagenase, centrifuged at low speed, filtered by cell screen, then inoculated into culture dish to obtain primary ADSCs.. The third generation of ADSCs was cultured with cartilage and lipopolipid induction medium. Type 鈪

本文編號：2221045