【摘要】：目的：探討經(jīng)典Wnt信號通路與骨形態(tài)發(fā)生蛋白9（bone morphogenetic protein9，BMP9）誘導小鼠間充質(zhì)干細胞C3H10T1/2細胞骨向分化的相互影響及分子機制。 方法： 1、以小鼠間充質(zhì)干細胞C3H10T1/2為目的細胞，，根據(jù)不同的處理因素將其分為4個組：GFP組、BMP9組、Wnt3a組、BMP9+Wnt3a組； 2、通過染色和定量測定早期成骨標志堿性磷酸酶（ALP）的活性； 3、應用Western blotting、Q-PCR檢測晚期成骨標志骨鈣蛋白（OC）、骨橋蛋白（OPN）的表達； 4、應用茜素紅染色檢測鈣鹽沉積的情況； 5、應用Western blotting、Q-PCR檢測成骨轉錄因子Runx2的表達； 6、應用異位成骨動物模型進行進一步驗證二者對干細胞成骨分化的相互影響。 結果： 1、在加入處理因素后第7天進行ALP染色和活性測定，發(fā)現(xiàn)Wnt3a+BMP9組的ALP活性比BMP9組、Wnt3a組明顯增高（P＜0.01）。 2、第14天進行茜素紅染色觀測鈣鹽沉積，結果發(fā)現(xiàn)從大體標本可以看到從GFP組、Wnt3a組、BMP9組、BMP9+Wnt3a組顏色有遞增的趨勢，鏡下發(fā)現(xiàn)BMP9+Wnt3a組的鈣鹽結節(jié)要明顯多于BMP9組、Wnt3a組。 3、在第9天應用Western blotting和Q-PCR檢測OC、OPN的表達，結果發(fā)現(xiàn)OC和OPN的表達在BMP9+Wnt3a組高于BMP9組和Wnt3a組。 4、在第2天應用Western blotting和Q-PCR檢測Runx2的表達，結果發(fā)現(xiàn)Runx2在BMP9+Wnt3a組中的表達要高于BMP9組和Wnt3a組 5、動物體內(nèi)接種4W后取出異位成骨的骨塊，觀測大體標本以及進行HE、Masson染色，結果顯示BMP9+Wnt3a組的骨塊大于BMP9組和Wnt3a組（P＜0.05），通過HE、Masson染色發(fā)現(xiàn)BMP9+Wnt3a組的骨塊比BMP9組和Wnt3a組的成熟度高。 結論：Wnt3a促進了BMP9誘導的小鼠間充質(zhì)干細胞C3H10T1/2的骨向分化，其中成骨關鍵基因Runx2可能作為二者的交匯點起了重要作用。
[Abstract]:Aim: to investigate the effects of classical Wnt signaling pathway and bone morphogenetic protein 9 (bone morphogenetic protein9,BMP9 (BMP 9) on bone differentiation of mouse mesenchymal stem cells (C3H10T1/2). Methods: 1. Murine mesenchymal stem cells (C3H10T1/2) were divided into four groups according to different treatment factors: BMP9 group (Wnt3a) and BMP9 Wnt3a group. (2) the activity of alkaline phosphatase (ALP) was detected by staining and quantitative analysis, and the expression of osteopontin (OPN) (OPN), osteopontin (OC),) was detected by Western blotting,Q-PCR. (4) calcium deposition was detected by alizarin red staining, and the expression of osteogenic transcription factor (Runx2) was detected by Western blotting,Q-PCR. 6. The effects of ectopic osteoblasts on osteogenic differentiation of stem cells were further verified by the animal model of ectopic osteogenesis. Results: 1. ALP staining and activity determination were performed on the 7th day after adding the treatment factors. It was found that the ALP activity of the Wnt3a BMP9 group was significantly higher than that of the BMP9 group (P < 0. 01). 2. The calcium deposition was observed by alizarin red staining on the 14th day. The results showed that the color of BMP9 Wnt3a group increased gradually from GFP group Wnt3a group. Under microscope, the calcium nodule of BMP9 Wnt3a group was significantly higher than that of BMP9 group Wnt3a group. On the 9th day, the expression of OC,OPN was detected by Western blotting and Q-PCR. The results showed that the expression of OC and OPN in BMP9 Wnt3a group was higher than that in BMP9 group and Wnt3a group. On the second day, Western blotting and Q-PCR were used to detect the expression of Runx2. The results showed that the expression of Runx2 in BMP9 Wnt3a group was higher than that in BMP9 group and Wnt3a group 5. After 4 weeks of inoculation in vivo, ectopic osteoblasts were taken out, gross specimens were observed and HE,Masson staining was performed. The results showed that the bone mass of BMP9 Wnt3a group was larger than that of BMP9 group and Wnt3a group (P < 0. 05), and the maturity of BMP9 Wnt3a group was higher than that of BMP9 group and Wnt3a group by HE,Masson staining. Conclusion the bone differentiation of mouse mesenchymal stem cells (C3H10T1/2) induced by BMP9 was promoted by Wnt3a, and the osteogenic key gene Runx2 may play an important role in the intersection of the two.
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R329

【共引文獻】

相關期刊論文 前10條

1 崔論;鄧廉夫;;富含半胱氨酸蛋白61在骨形成與修復中的作用[J];國際骨科學雜志;2009年03期

2 劉春喜;蘇迎春;孫瑩璞;;Wnt信號途徑及其調(diào)節(jié)因子Dkk與子宮內(nèi)膜容受性[J];國際生殖健康/計劃生育雜志;2010年02期

3 劉祿林;林華;徐又佳;;RNA干擾技術與骨質(zhì)疏松癥[J];中華骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病雜志;2014年01期

4 馬玉新;祝頌松;;Wnt信號通路與軟骨細胞增殖分化關系的研究現(xiàn)狀[J];臨床口腔醫(yī)學雜志;2013年11期

5 孫文娟;唐倩;黃南楠;;Wnt信號通路與牙周膜[J];口腔醫(yī)學;2014年01期

6 胡麗芳;騫愛榮;商澎;;骨硬化蛋白與骨代謝[J];生命的化學;2011年05期

7 唐泉;孫元明;;經(jīng)典Wnt信號通路對成骨細胞增殖和分化的影響[J];天津醫(yī)藥;2012年02期

8 孫為;王遠勤;晏奇;盧銳;施斌;;Effects of Er-Zhi-Wan on Microarchitecture and Regulation of Wnt/β-catenin Signaling Pathway in Alveolar Bone of Ovariectomized Rats[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2014年01期

9 劉思佳;孫占娟;周亞歐;左曉霞;;~(99)Tc-亞甲基二膦酸鹽對膠原誘導性關節(jié)炎大鼠骨侵蝕的治療作用[J];國際病理科學與臨床雜志;2010年02期

10 許連靜;秦明群;毛峻武;黃聲富;;增齡因素與壓力側牙周組織Wnt-1及護骨素的表達[J];中國組織工程研究與臨床康復;2011年07期

相關博士學位論文 前5條

1 洪盾;成骨分化中糖皮質(zhì)激素信號通路的研究[D];浙江大學;2011年

2 王燕;2型糖尿病骨質(zhì)疏松癥的基礎與臨床研究[D];河北醫(yī)科大學;2011年

3 劉艷;鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶參與肺癌骨轉移的機制研究[D];第四軍醫(yī)大學;2010年

4 張燕;DDR2在成骨細胞分化過程中的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學;2010年

5 王薇;種植體微納米形貌對成骨細胞行為影響的分子機制研究[D];第四軍醫(yī)大學;2013年

相關碩士學位論文 前8條

1 孟德芳;系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者骨髓間充質(zhì)干細胞衰老相關研究[D];南京大學;2011年

2 孫占娟;~（99）Tc-MDP對膠原誘導性關節(jié)炎大鼠的治療作用及對Wnt信號通路的影響[D];中南大學;2011年

3 許連靜;增齡因素與壓力側牙周組織Wnt-1及護骨素的表達[D];桂林醫(yī)學院;2011年

4 徐陽;護骨素和Wnt3a、Wnt5a在口腔正畸骨改建中的表達[D];桂林醫(yī)學院;2012年

5 唐泉;電離輻射對MC3T3-E1細胞誘導的成骨細胞增殖分化及Notch信號通路的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

6 周藝杰;前方牽引致上頜骨改建壓力側骨縫周圍組織中護骨素及Wnt-5a的表達[D];桂林醫(yī)學院;2013年

7 魏亞蘭;鹽酸二甲雙胍對人成骨細胞增殖及CollagenⅠ、LRP5mRNA表達的影響[D];山西醫(yī)科大學;2013年

8 劉祿林;鐵蓄積對去勢大鼠骨代謝影響的實驗研究[D];蘇州大學;2014年

本文編號：2203192