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46,XX,t(5;15)(q21.1;q21.2)相互易位染色體斷裂重接點定位方法探索

發(fā)布時間:2018-08-05 10:42
【摘要】:背景:染色體相互易位存在染色體的斷裂重接,可通過改變基因內(nèi)部結(jié)構(gòu)或基因與其作用元件相對位置,從而導致基因表達異常而表現(xiàn)出疾病表型。常規(guī)細胞遺傳學檢測只能對斷裂區(qū)域作出粗略估計,無法精確定位。新發(fā)展起來的Array painting及多種基于第二代測序技術(shù)的定位方法對實驗人員的數(shù)據(jù)分析能力要求嚴格,且費用昂貴。 目的:運用細胞遺傳學、分子細胞遺傳學、分子遺傳學等相關技術(shù),精確定位一例有異常表型的46,XX,t(5;15)(q21.1;q21.2),15pss相互易位患者的染色體斷裂點。建立染色體斷裂點定位的常規(guī)方案,探討染色體重排與表型的關系。 方法:本實驗從三條技術(shù)路徑嘗試對染色體斷裂點進行精確定位:1、短片段探針熒光原位雜交定位法;2、長片段PCR定位法;3、激光顯微切割與PCR結(jié)合定位法。 結(jié)果:方法1和方法2未能得到理想結(jié)果,運用方法3將斷裂點定位在小于2kb范圍內(nèi)。 結(jié)論:激光顯微切割與PCR結(jié)合定位法可運用于對染色體斷裂點的精確定位。
[Abstract]:Background: chromosomal translocation may result in abnormal gene expression by altering the internal structure of the gene or the relative position of the gene to its acting elements. Conventional cytogenetic testing can only make a rough estimate of the fracture area and cannot accurately locate it. The newly developed Array painting and many localization methods based on the second generation sequencing technology require strict and expensive data analysis ability of the experimenters. Objective: to accurately locate the chromosomal breakpoints in a patient with abnormal phenotype by cytogenetics, molecular genetics and other related techniques. To study the relationship between chromosome rearrangement and phenotype, a routine scheme of chromosome breakpoint location was established to study the relationship between chromosome rearrangement and phenotype. Methods: in this experiment, we try to locate the chromosome breakpoints precisely at 1: 1 by three technical paths, by fluorescence in situ hybridization (Fish) with short fragment probes, 3 by long fragment PCR, and by the combination of laser microdissection and PCR. Results: methods 1 and 2 failed to obtain ideal results. Method 3 was used to locate the fracture point in the range of less than 2kb. Conclusion: laser microdissection combined with PCR can be used to locate chromosome breakpoints accurately.
【學位授予單位】:中南大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2012
【分類號】:R346

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