【摘要】：目的克隆人細(xì)胞角蛋白CK9的cDNA,通過(guò)原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)融合蛋白并進(jìn)行純化和鑒定。方法從人角質(zhì)形成細(xì)胞系(HaCaT)中提取RNA,以RT-PCR反轉(zhuǎn)錄cDNA,使用特異性引物PCR擴(kuò)增出人CK9編碼區(qū)全長(zhǎng)并克隆到pET-28a載體上,再用IPTG誘導(dǎo)融合蛋白his-CK9的表達(dá)。表達(dá)的融合蛋白通過(guò)Ni 2+親和層析純化后,進(jìn)行SDS-PAGE和Western blot鑒定。結(jié)果測(cè)序鑒定構(gòu)建表達(dá)載體中CK9的cDNA序列正確;融合蛋白his-CK9可在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá);純化的融合蛋白his-CK9純度較高;純化的融合蛋白his-CK9可與商品化CK9抗體特異性結(jié)合。結(jié)論成功構(gòu)建原核表達(dá)載體pET-28a-CK9,并成功誘導(dǎo)及純化融合蛋白his-CK9。
[Abstract]:Objective to clone the cDNAof human cytokeratin CK9 and express the fusion protein by prokaryotic expression system. Methods RNAs were extracted from human keratinocyte cell line (HaCaT) and reverse transcripted cDNA.Human CK9 coding region was amplified by specific primer PCR and cloned into pET-28a vector. The expression of fusion protein his-CK9 was induced by IPTG. The fusion protein was purified by Ni 2 affinity chromatography and identified by SDS-PAGE and Western blot. Results the cDNA sequence of CK9 was correct, the fusion protein his-CK9 could be expressed in Escherichia coli, the purified fusion protein his-CK9 was of high purity, and the purified fusion protein his-CK9 could specifically bind to commercial CK9 antibody. Conclusion the prokaryotic expression vector pET-28a-CK9 was successfully constructed and the fusion protein his-CK9 was successfully induced and purified.
【作者單位】： 西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)中心;西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)系;陜西省腫瘤精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院皮膚科;西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部附屬紅會(huì)醫(yī)院骨壞死與關(guān)節(jié)重建病區(qū);西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨科;西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81273211,81201373) 陜西省社會(huì)發(fā)展科技攻關(guān)項(xiàng)目(No.2016SF-238) 西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院基金資助項(xiàng)目(No.2016QN-13)~~
【分類號(hào)】：R3416

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本文編號(hào)：2127518