本文選題：神經元 + 干細胞�。� 參考：《中國全科醫(yī)學》2017年33期

【摘要】：目的探討Let-7b在大鼠骨髓間充質干細胞(MSCs)分化為神經元過程中的作用。方法 2013年1—12月將80只SPF級SD大鼠隨機分為空白對照組、陰性對照組、Let-7b-up慢病毒載體(LV-rno-Let-7bup)組、Let-7b-inhibition慢病毒載體(LV-rno-Let-7b-inhibition)組,每組20只。將陰性對照組、LV-rnoLet-7b-up組、LV-rno-Let-7b-inhibition組大鼠分別感染EGFP空病毒,采用頸椎脫臼法處死4組大鼠,并獲取MSCs,傳代培養(yǎng)4代后備用。取傳代培養(yǎng)的MSCs感染慢病毒,具體為:空白對照組、陰性對照組不進行感染,LVrno-Let-7b-up組、LV-rno-Let-7b-inhibition組分別感染LV-rno-Let-7b-up、Let-7b-inhibition,采用MTT法檢測感染前、感染后24 h、感染后5 d MSCs存活率。采用法舒地爾對4組進行誘導實驗,觀察MSCs分化為神經元的分化效率。采用免疫組化法檢測4組神經元烯醇化酶(NSE)、神經微管結合蛋白(MAP-2)、微管相關蛋白(Tau)水平,RT-PCR法檢測4組NSE、MAP-2、Tau mRNA水平。結果 LV-rno-Let-7b-up組MSCs于LVrno-Let-7b-up感染后第3天熒光表達最強,LV-rno-Let-7b-inhibition組MSCs于LV-rno-Let-7b-inhibition感染后第5天熒光表達最強。感染第5天時,陰性對照組、LV-rno-Let-7b-up組、LV-rno-Let-7b-inhibition組MSCs感染率分別為87.46%、86.81%、87.12%。感染后24 h、5 d陰性對照組、LV-rno-Let-7b-up組、LV-rno-Let-7b-inhibition組MSCs存活率低于空白對照組(P0.05);陰性對照組、LV-rno-Let-7b-up組、LV-rno-Let-7b-inhibition組感染后5 d MSCs存活率高于感染后24 h(P0.05)。陰性對照組和空白對照組部分MSCs呈現(xiàn)神經元樣改變;LV-rno-Let-7b-up組極大部分MSCs出現(xiàn)典型的神經元樣結構;LV-rno-Let-7b-inhibition組僅有少量MSCs出現(xiàn)典型的神經元樣結構。LV-rno-Let-7b-up組NSE、MAP-2、Tau及其mRNA水平高于空白對照組、陰性對照組(P0.05);LV-rno-Let-7b-inhibition組NSE、MAP-2、Tau及其mRNA水平低于空白對照組、陰性對照組(P0.05)。結論感染LV-rno-Let-7b-up后大鼠MSCs分化為神經元的分化效率增加,提示Let-7b可促進MSCs向神經元分化。
[Abstract]:Objective to investigate the role of Let-7b in the differentiation of rat bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) into neurons. Methods from January to December 2013, 80 SPF SD rats were randomly divided into blank control group and LV-rno-Let-7bup group, 20 rats in each group were divided into two groups: LV-rno-Let-7b-inhibition group (LV-rno-Let-7b-inhibition) group and LV-rno-Let-7b-inhibition group (LV-rno-Let-7b-exhibition) group. The rats of LV-rnoLet-7b-up group in negative control group were infected with EGFP empty virus respectively. The rats of 4 groups were killed by cervical dislocated method. MSCs were obtained and cultured for 4 generations. The cultured MSCs were infected with lentivirus. The control group and negative control group were respectively infected with LV-rno-Let-7b-inhibition group. The survival rate of MSCs before infection, 24 hours after infection and 5 days after infection was detected by MTT method. The differentiation efficiency of MSCs into neurons was observed by using fasudil to induce the four groups. The levels of neuron enolase (NSE), neural microtubule-binding protein (MAP-2) and microtubule-associated protein (Tau) were detected by immunohistochemistry. Results the fluorescence expression of MSCs in LV-rno-Let-7b-up group was the strongest on the 3rd day after LVrno-Let-7b-up infection. The fluorescence expression of MSCs in LV-rno-Let-7b-exhibition group was the strongest on the 5th day after LV-rno-Let-7b-inhibition infection. On the 5th day of infection, the infection rate of MSCs in LV-rno-Let-7b-up group in negative control group was 87.46 and 87.12 in LV-rno-Let-7b-exhibition group, respectively. The survival rate of MSCs in the LV-rno-Let-7b-up group was lower than that in the control group (P0.05), and the survival rate of MSCs in the LV-rno-Let-7b-inhibition group was higher than that in the LV-rno-Let-7b-inhibition group at 5 days after infection (P0.05). In the negative control group and the blank control group, some MSCs showed neuron-like changes. Most of the MSCs in the LV-rno-Let-7b-up group showed typical neuron-like structure. Only a small number of MSCs in the LV-rno-Let-7b-exhibition group showed typical neuron-like structure. The NSEV-rno-Let-7b-up group showed higher NSE-MAP-2Tau and mRNA levels than those in the blank control group. LV-rno-Let-7b-inhibition group (P0.05) had lower mRNA levels of NSE-MAP-2Tau and negative control group (P0.05). Conclusion the differentiation efficiency of MSCs into neurons increased after infection with LV-rno-Let-7b-up, suggesting that Let-7b can promote the differentiation of MSCs into neurons.
【作者單位】： 鄭州大學附屬鄭州中心醫(yī)院神經內科;莫斯科國立謝東諾夫第一醫(yī)科大學;鄭州大學第一附屬醫(yī)院神經內科;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(81071114,81371385)
【分類號】：R329.2

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