本文選題：埃博拉病毒 + 復(fù)制型病毒樣顆粒　； 參考：《病毒學(xué)報(bào)》2017年03期

【摘要】：為了研究埃博拉病毒的生物學(xué)特性及其與宿主的相互作用,構(gòu)建無致病基因的復(fù)制型埃博拉病毒樣顆粒(Transcription and replication competent virus-like particles,trVLPs)成為在BSL-2實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行研究的理想途徑。本研究目的是表達(dá)和鑒定復(fù)制型埃博拉病毒樣顆粒(trVLPs)。本研究利用埃博拉病毒7個(gè)蛋白的基因組片段(VP40、VP24、GP、VP35、VP30、L、NP)和一個(gè)報(bào)告基因片段重組構(gòu)建了表達(dá)質(zhì)粒,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,通過熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定報(bào)告基因的表達(dá)活性確定了復(fù)制型埃博拉病毒樣顆粒(trVLPs)的成功表達(dá)。進(jìn)一步通過超離轉(zhuǎn)染細(xì)胞的上清純化得到病毒樣顆粒(trVLPs),在透射電子顯微鏡下觀察到了典型的絲狀結(jié)構(gòu)。對(duì)病毒樣顆粒進(jìn)行熒光標(biāo)記并感染Vero細(xì)胞,在熒光顯微鏡下觀察到細(xì)胞中出現(xiàn)點(diǎn)狀和絲狀的熒光信號(hào)。復(fù)制型埃博拉病毒樣顆粒的成功表達(dá)為進(jìn)一步研究埃博拉病毒的生物學(xué)特性以及與宿主相互作用機(jī)制提供了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to study the biological characteristics of Ebola virus and its interaction with host, the construction of replication and replication competent virus-like particles-like VLPs with no pathogenic gene is an ideal way to study in BSL-2 laboratory. The aim of this study was to express and identify replicative Ebola virus-like particles (trVLPs). In this study, the expression plasmid was constructed using the genomic fragment of 7 proteins of Ebola virus (VP40, VP24GPG, VP35, VP30, LNP) and a reporter gene fragment, which was transiently transfected into 293T cells. The successful expression of replicative Ebola virus-like particles (trVLPs) was determined by luciferase detection system. Virus like particles (trVLPs) were further purified from the supernatant of the transfected cells. The typical filamentous structures were observed under transmission electron microscope (TEM). The virus like particles were labeled with fluorescence and infected with Vero cells. The fluorescence signals of dot and filamentous were observed under fluorescence microscope. The successful expression of replicative Ebola virus-like particles provides a basis for further studying the biological characteristics of Ebola virus and the mechanism of interaction with host.
【作者單位】： 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所;中國(guó)科學(xué)院武漢病毒研究所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(項(xiàng)目號(hào):81590763),題目:埃博拉病原學(xué)研究
【分類號(hào)】：R373

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本文編號(hào)：2061076