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骨膜細胞體外分化成骨的基因表達和功能檢測

發(fā)布時間:2018-06-21 23:18

  本文選題:骨膜細胞 + 成骨分化 ; 參考:《汕頭大學》2011年碩士論文


【摘要】:【目的】 觀察骨膜細胞經(jīng)成骨因子BMP7誘導后的細胞生物學特征,鑒定骨膜細胞經(jīng)BMP7體外誘導分化為成骨細胞的基因表達和細胞功能。 【方法】 取材于成人脛骨骨膜,常規(guī)體外培養(yǎng)。實驗分為實驗組和對照組,分別加入BMP7加成骨輔助劑和單純成骨輔助劑進行培養(yǎng)。CCK-8法檢測細胞增殖活性,第5天、第10天、第15天和第20天分別采用RealTime-PCR檢測骨鈣素基因表達,ELISA法檢測上清液ALP、骨鈣素及骨橋蛋白的水平,甲苯胺藍染色檢測糖胺聚糖及RealTime-PCR檢測Ⅱ型膠原基因,比色法檢測細胞ALP活性,ALP染色法檢測ALP、Von Kossa染色法檢測鈣結節(jié)。 【結果】 1、兩組骨鈣素基因表達及上清液ALP、骨鈣素、骨橋蛋白的含量均增高,實驗組與對照組差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 2、兩組細胞的ALP和鈣結節(jié)染色陽性率增高,實驗組與對照組差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 3.、甲苯胺藍染色陽性率及Ⅱ型膠原基因表達表現(xiàn)為先高后低,實驗組與對照組差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 【結論】 1、骨膜細胞在BMP7誘導下體外大量增殖、分化成骨,經(jīng)過基因和細胞功能檢測證實其具有明顯的成骨特異基因表達,并具有合成、分泌成骨特異蛋白的功能。 2、BMP7體外誘導骨膜細胞成骨分化過程中,除直接分化成骨外,還存在部分細胞先經(jīng)軟骨細胞形成再鈣化成骨的現(xiàn)象。 3、經(jīng)骨膜細胞-BMP7途徑在體外可獲取大量具備典型生物學特征的成骨細胞,并可用于組織工程的體外構骨及臨床應用。
[Abstract]:[objective] to observe the biological characteristics of periosteal cells induced by osteogenic factor BMP7. To identify the gene expression and cell function of osteoblasts induced by BMP7. [methods] the periosteum of adult tibia was cultured in vitro. The experiment was divided into experimental group and control group. BMP7 plus bone assistant and osteoblast adjuvant were added respectively to culture. CCK-8 method was used to detect cell proliferation activity. On the 15th and 20th days, the levels of ALP, osteocalcin and osteopontin in supernatant were detected by RealTime-PCR, glycosaminoglycan by toluidine blue staining and collagen 鈪,

本文編號:2050464

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