本文選題：人臍帶間充質(zhì)干細胞 + 低氧　； 參考：《山東大學學報(醫(yī)學版)》2017年07期

【摘要】：目的探討低氧對人臍帶間充質(zhì)干細胞(h UC-MSCs)中Sirtuin(SIRT)蛋白表達影響及與細胞增殖的關系。方法組織塊貼壁法分離和培養(yǎng)h UC-MSCs;流式細胞儀鑒定細胞表面標志物;CCK-8法測定低氧與常氧下不同時間點h UC-MSCs的增殖能力;流式細胞儀檢測低氧與常氧下細胞周期的變化;免疫熒光與Western blotting測定低氧與常氧下細胞SIRT蛋白定位與表達。結果成功分離h UC-MSCs;細胞CD90、CD105、CD29、CD44高表達,CD14、CD19、CD34、CD45、HLA-DR無表達;CCK-8測定低氧培養(yǎng)24、48、72 h細胞的增殖能力均高于常氧培養(yǎng)(P均0.05);在低氧下培養(yǎng)24、48 h后S期細胞比率高于常氧培養(yǎng)(P均0.05);免疫熒光檢測SIRT1、6位于細胞核內(nèi),SIRT2定位于胞漿,SIRT3、4、5定位于線粒體。Western blotting測定SIRT1在低氧培養(yǎng)24、48 h蛋白表達量均高于常氧條件(P均0.05),常氧培養(yǎng)72 h的SIRT1表達量高于24 h及48 h(P均0.05);SIRT2表達量在低氧培養(yǎng)24 h高于常氧培養(yǎng)(P0.05),48 h后低于常氧培養(yǎng),72 h后高于常氧培養(yǎng)(P0.05);低氧培養(yǎng)24、48、72 h后SIRT5的表達量均高于常氧處理(P均0.05),常氧與低氧培養(yǎng)細胞48 h和72 h后均高于24 h時SIRT5的表達(P均0.05)。結論低氧處理24、48、72 h均可以促進h UC-MSCs的增殖。低氧誘導SIRT1、2與5表達改變提示SIRT1、2、5可能參與了低氧對h UC-MSCs增殖的調(diào)控。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of hypoxia on the expression of Sirtuintin-SIRT protein in human umbilical cord mesenchymal stem cells (hUC-MSCs) and its relationship with cell proliferation. Methods hUC-MSCs were isolated and cultured by tissue mass adherence method, cell surface marker (CCK-8) was identified by flow cytometry, the proliferative ability of hUC-MSCs at different time points under hypoxia and normoxia was determined by flow cytometry, the changes of cell cycle under hypoxia and normoxia were detected by flow cytometry. The localization and expression of SIRT protein in hypoxic and normoxic cells were detected by immunofluorescence and Western blotting. Results Human UC-MSCs were successfully isolated, the high expression of CD90, CD105, CD29, CD44, CD14, CD19, CD34, CD45, CD45, HLA-DR, and CCK-8 were all higher than those in normoxic culture (P = 0.05, P = 0.05), and the percentage of S phase cells was higher than that in normoxic culture (P < 0.05). Localization of SIRT6 in cytoplasm SIRT2 and mitochondria. Western blotting Detection of SIRT1 protein expression at 24 h in hypoxia culture was higher than that in normoxic condition (P 0.05). The expression of SIRT1 in normal oxygen culture at 72 h was higher than that in 24 h and 48 h P The expression of SIRT2 in 24 h hypoxia culture was higher than that in normal oxygen culture after 48 h, and was higher than that in normal oxygen culture (72 h after 72 h), the expression of SIRT5 in hypoxia culture was higher than that in normal oxygen treatment (P 0.05), the expression of SIRT5 in hypoxia culture was higher than that in normal oxygen culture (P 0.05), and the expression of SIRT5 in hypoxia culture was higher than that in normal oxygen culture (48 h) and hypoxia culture (48 h). The expression of SIRT5 at 72 h was higher than that at 24 h. Conclusion hypoxia treatment can promote the proliferation of hUC-MSCs for 72 h. Hypoxia induced changes in the expression of SIRT1O-2 and 5 suggest that SIRT1m2O5 may be involved in the regulation of hypoxia on the proliferation of hUC-MSCs.
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學第三臨床醫(yī)學院附屬奉賢區(qū)中心醫(yī)院神經(jīng)外科;上海交通大學生命科學技術學院;南方醫(yī)科大學第三臨床醫(yī)學院附屬奉賢區(qū)中心醫(yī)院中心實驗室;
【基金】：國家自然科學基金(10972141,11172176,31570949)
【分類號】：R329.2

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本文編號：2045144