本文選題：酪蛋白糖巨肽 + 樹突狀細(xì)胞�。� 參考：《天津商業(yè)大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：酪蛋白糖巨肽(Casein Glycomacropeptide,CGMP)是來源于乳中κ-酪蛋白的一個多肽片斷,眾多學(xué)者研究證實(shí),CGMP具有多種生物活性功能。本研究在以往學(xué)者研究的基礎(chǔ)上,以購得的進(jìn)口純品CGMP為刺激物,研究CGMP對先天免疫和獲得性免疫的調(diào)節(jié)作用。一方面用Balb/c小鼠為實(shí)驗(yàn)動物,將一系列不同濃度的CGMP分別以灌胃和腹腔注射兩種方式給藥,給藥2小時后分別眼眶取血,分離血清,利用懸浮液體芯片系統(tǒng),檢測小鼠外周血血清中24種細(xì)胞因子的濃度,研究CGMP對小鼠細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的影響作用和對小鼠可能產(chǎn)生的先天免疫應(yīng)答作用。結(jié)果口服給藥后有顯著變化的細(xì)胞因子有4種,分別為GM-CSF、IFN-γ、IL-2、MIP-1α;腹腔注射后有顯著變化的細(xì)胞因子有7種,分別為Eotaxin、TNF-α、G-CSF、GM-CSF、IL-6、IL-17、KC。另一方面以C57BL/6雄性小鼠為實(shí)驗(yàn)動物,誘導(dǎo)培養(yǎng)其骨髓源樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells,DCs),培養(yǎng)至合適時間后將一系列不同濃度的CGMP添加到DCs培養(yǎng)體系中,分別以空白完全培養(yǎng)基和LPS做為空白對照和陽性對照,繼續(xù)培養(yǎng),培養(yǎng)48h后分離細(xì)胞培養(yǎng)液和細(xì)胞,用流式細(xì)胞儀檢測DCs的成熟情況;同時,將添加刺激物并培養(yǎng)48h后的DCs與分離純化后得到的T細(xì)胞以不同比例混合,將兩種細(xì)胞共同孵育96h,用CCK-8試劑盒檢測DCs對T細(xì)胞的增殖程度的作用。選擇DCs對T細(xì)胞增殖作用最強(qiáng)烈的兩者的比值,同樣用CGMP刺激DCs后進(jìn)行混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束分離細(xì)胞培養(yǎng)上清液,檢測其中的24中細(xì)胞因子濃度。結(jié)果表明:細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的細(xì)胞因子有顯著變化的8種分別為G-CSF、GM-CSF、IFN-γ、IL-1α、IL-2、IL-4、IL-5、IP-10;各濃度的CGMP均能促進(jìn)DCs的成熟,但其促進(jìn)DCs成熟的作用低于陽性對照LPS;DCs與T細(xì)胞的共培養(yǎng)結(jié)果顯示經(jīng)CGMP刺激成熟的DCs能促進(jìn)T細(xì)胞增殖,說明DCs對這種肽或其水解的片段具有抗原提呈作用,繼而引起相應(yīng)免疫細(xì)胞的活化、增殖。
[Abstract]:Casein glycosylated peptide (CGMPP) is a polypeptide fragment derived from milk 魏 -casein. Many studies have confirmed that CGMP has a variety of bioactive functions. On the basis of previous studies, the effects of CGMP on innate and acquired immunity were studied with imported CGMP as stimulant. On the one hand, Balb / c mice were used as experimental animals. A series of CGMP of different concentrations were given by intragastric and intraperitoneal injection respectively. After 2 hours of administration, blood was taken from the orbit, serum was separated, and the suspension liquid chip system was used. The effects of CGMP on cytokine network and innate immune response in mice were studied by detecting the concentration of 24 cytokines in peripheral blood of mice. Results there were 4 kinds of cytokines which changed significantly after oral administration, namely GM-CSF- 緯 IFN- 緯 IL-2mMIP-1 偽, and 7 kinds of cytokines (eotaxin TNF- 偽 G-CSFU GM-CSFU IL-6IL-17KC) after intraperitoneal injection. On the other hand, C57BL / 6 male mice were used as experimental animals to induce and culture bone marrow-derived dendritic cells (DC) cells, and a series of CGMP of different concentrations were added to DCs culture system. The culture medium and LPS were used as blank control and positive control respectively. After 48 hours of culture, the cell culture medium and cells were separated, and the maturation of DCs was detected by flow cytometry. The DCs cultured for 48 h were mixed with the purified T cells in different proportions. The two kinds of cells were incubated together for 96 h. The effect of DCs on the proliferation of T cells was detected by CCK-8 kit. The ratio of DCs to T cell proliferation was chosen, and the mixed lymphocyte reaction was carried out after DCs were stimulated by CGMP. Cell culture supernatants were isolated at the end of the reaction and 24 of them were detected for cytokine concentration. The results showed that 8 kinds of cytokines in the supernatant of cell culture were G-CSFU GM-CSFU IFN- 緯, IL-1 偽, IL-2mil, IL-4, IL-5, IP-10, and CGMP at different concentrations could promote the maturation of DCs. The results of co-culture of DCs and T cells showed that the mature DCs stimulated by CGMP could promote the proliferation of T cells, indicating that DCs had antigenic effect on this peptide or its hydrolyzed fragments. In turn, it causes the activation and proliferation of the corresponding immune cells.
【學(xué)位授予單位】：天津商業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R392

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本文編號：2023193