本文選題：Apo-E + 胸導管��； 參考：《河北醫(yī)科大學》2012年碩士論文

【摘要】：目的：肝臟是人體內的重要器官，在物質代謝尤其是脂肪代謝、生物轉化上起著重要的作用。載脂蛋白E(apolipoprotein E，Apo-E)是在1973年由Shore等，首先在正常人的極低密度脂蛋白中發(fā)現(xiàn)的，它由肝細胞合成，是乳糜微粒(CM)、極低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL)的組成部分,也是極低密度脂蛋白受體的重要配體；它還參與脂蛋白的轉化與代謝過程，其基因可以調節(jié)許多生物學功能。眾所周知，淋巴管道是一種單向引流管道，主要從各器官、組織回收淋巴液、脂肪和蛋白質等大分子物質，再以淋巴的形式注入血液。肝臟產(chǎn)生的大量淋巴，大都經(jīng)過胸導管回流。了解Apo-E，對脂蛋白的轉化與代謝，具有重要的生理和病理意義。本實驗擬通過對正常飲食SD大鼠和高脂飲食喂養(yǎng)SD大鼠，結扎胸導管動物模型的肝組織，其Apo-E免疫反應陽性細胞形態(tài)學對比觀察，為探討Apo-E的轉運，以及高脂喂養(yǎng)、實驗性淋巴瘀滯，分別對肝組織形態(tài)結構的影響，提供形態(tài)學研究證據(jù)。 方法： 1、實驗動物與取材 選用40只1月齡健康SD大鼠，體重約100g，雌雄不拘，身長約12cm（鼻尖至尾根），由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供。隨機分為兩組：A組，正常飲食組（20只）；B組，高脂飲食組（20只）。喂養(yǎng)10周后，將A組隨機分為A1組，即假手術組（10只）；A2組，手術組（10只）；B組隨機分為B1組，假手術組（10只）；B2組，手術組（10只）。造模成功后繼續(xù)分別喂養(yǎng)6個月后取材，對肝組織進行光鏡、電鏡觀察。 2、光鏡樣品制備及觀察 石蠟包埋的肝組織切片，行常規(guī)的HE染色和光鏡觀察；從而顯示肝組織微細結構、血管淋巴系統(tǒng)的分布特點。 3、免疫組織化學染色及光鏡觀察 A組和B組SD大鼠的肝組織進行石蠟包埋切片，行Apo-E免疫組化染色，光鏡觀察Apo-E及受體免疫組化結果，在肝組織細胞上，免疫反應表達陽性。 4、掃描和透射電鏡的樣品制備及觀察 肝組織標本行常規(guī)掃描和透射電鏡樣品的制備和觀察；以揭示SD大鼠的肝組織超微結構特點，以及實驗性高脂喂養(yǎng)和淋巴淤滯，分別對肝組織和細胞超微結構帶來的影響。 結果： 1、實驗手術中肉眼觀察 因為術前給予動物灌入食用油，經(jīng)腸道吸收，使得腸系膜淋巴管、腸干、乳糜池及胸導管等，因吸收和運送乳糜物質而呈乳白色，術中易于辨認。于腹腔膈腳下準確結扎胸導管后，結扎部位以下淋巴管充盈變粗。 實驗中肉眼可見，A1組肝臟呈暗紅色，并且有光澤，被膜光滑，邊緣圓潤；A2組、B1組和B2組肝臟體積增大，邊緣變鈍，被膜緊張，表面無光澤，有油膩感，甚至可見脂肪組織包裹。 2、HE染色組織切片光鏡觀察 在假手術組（A1），其肝組織結構完整，肝小葉結構清晰，六邊形肝小葉中央，可見一中央靜脈；肝細胞索以中央靜脈為中心，向周圍呈放射狀排列。在相鄰肝小葉之間的匯管區(qū)，可見三種管道：小葉間動脈、小葉間靜脈、小葉間膽管相伴存在。在手術組（A2）的肝組織中，脂肪細胞數(shù)目增多，所占體積變大，呈彌漫性脂肪變性；肝細胞腫脹增大，肝血竇周圍間隙變窄；匯管區(qū)出現(xiàn)明顯的炎性細胞侵潤，以淋巴細胞為主。 在假手術組（B1），肝組織中可見脂肪細胞浸潤；部分肝細胞胞質中出現(xiàn)大小不等的球形空泡，胞質基質疏松，呈局限性脂肪變性。肝細胞膜緊張，顏色變淡。在手術組（Ｂ2），肝組織中空泡樣的脂肪細胞數(shù)目增多，體積變大；肝細胞腫大變圓，胞核被推擠到細胞一側；少量肝細胞出現(xiàn)細胞核固縮甚至壞死現(xiàn)象，肝小葉呈現(xiàn)片狀壞死；匯管區(qū)結締組織內，出現(xiàn)以淋巴細胞為主的炎性細胞浸潤。肝組織發(fā)生中、重度脂肪變性；繼而肝組織結構變得不完整，肝小葉的結構出現(xiàn)異常，甚至呈現(xiàn)灶狀壞死。 3、免疫組織化學染色光鏡觀察 在假手術組（A1），其肝組織可見均勻的載脂蛋白E免疫反應陽性結果，呈現(xiàn)棕褐色顆粒物質沉積。在手術組（A2），肝組織可見增強的載脂蛋白E免疫反應陽性結果，棕褐色顆粒沉積增多，且有統(tǒng)計學意義。 在假手術組（B1），其肝組織可見與假手術組（A1）類似的，均勻的Apo-E免疫反應陽性結果，呈現(xiàn)棕褐色顆粒物質沉積。手術組（Ｂ2）可見與手術組（A2）相似的載脂蛋白E免疫反應陽性表達增強，棕褐色顆粒物質沉積增多，且有統(tǒng)計學意義。 4、超薄組織切片透射電鏡觀察 在假手術組（A1），其肝細胞膜結構清晰，胞核圓且居中，可見多個核仁位于核的中央?yún)^(qū)；肝細胞的胞漿內，可見大量線粒體、粗面內質網(wǎng)和溶酶體等細胞器。未見炎性細胞浸潤和纖維增生。在手術組（A2），其肝細胞核的核膜增厚，核內染色質聚集，胞質空曠、電子密度降低，并出現(xiàn)脂肪變表現(xiàn)。在肝血竇的竇周隙內和肝細胞之間，可見明顯的脂類物質的沉積，，纖維結締組織增多。易見肝細胞體積縮小，胞質內細胞器減少；胞核固縮，體積縮小，電子密度明顯增強。 在假手術組（B1），肝細胞核內染色質聚集，基質分布不均，胞漿內細胞器減少、基質增多，出現(xiàn)明顯脂質沉積。肝細胞之間可見脂質物質的沉積和結締組織纖維的增多。在手術組（Ｂ2），肝細胞的核膜不連續(xù)，核膜孔增大。在肝血竇的竇周隙內和肝細胞之間，可見大量脂質沉積，纖維結締組織明顯增多。易見胞核固縮、細胞凋亡，肝細胞索排列紊亂，毛細膽管擴張，膽汁淤積。在部分細胞內，可見巨大的線粒體。粗面內質網(wǎng)擴張，部分出現(xiàn)脫顆�，F(xiàn)象，胞漿內可見脂滴。肝細胞之間和匯管區(qū)內，也可見大量結締組織纖維增生。 5、掃描電鏡觀察 掃描電鏡觀察顯示，在正常大鼠肝臟表面，覆蓋一層由扁平上皮細胞構成的腹膜；在扁平上皮細胞表面，尤其是上皮細胞的邊緣部位，存在大量的板狀和指狀微絨毛，上皮細胞含核的部位明顯突出、隆起。在肥胖或胸導管結扎大鼠，其肝被膜上皮細胞表面的微絨毛結構明顯減少。 結論： 1、胸導管為肝臟淋巴回流的主要通道；于腹部膈腳下結扎胸導管，可成功建立肝淋巴瘀滯的實驗動物模型。 2、長期高脂飲食可誘發(fā)大鼠肥胖，引起肝組織內脂質沉積，影響脂類物質代謝，甚至造成肝功能損害。 3、實驗性肝淋巴瘀滯可影響脂類物質的轉運及代謝，誘發(fā)肝組織內脂肪堆積，肝細胞脂肪樣變，Apo-E免疫陽性反應表達增強；推測胸導管是轉運Apo-E的重要途徑。
[Abstract]:Objective: the liver is an important organ in the human body, which plays an important role in material metabolism, especially in fat metabolism and biotransformation. Apolipoprotein E (Apo-E) is found in the normal human very low density lipoprotein (Shore) in 1973. It is synthesized by hepatocytes, CM, and extremely low density lipoprotein (V) (V). LDL) and the components of the high density lipoprotein (HDL) are also important ligands for the very low density lipoprotein receptor; it is also involved in the transformation and metabolism of lipoprotein, and its genes can regulate many biological functions. It is known that lymphatic pipes are a one-way drainage pipeline that reclaims lymph, fat, and protein mainly from organs and tissues. The large number of molecules are injected into the blood in the form of lymph. Most of the lymph nodes produced by the liver are reflued through the thoracic duct. To understand Apo-E, it is of important physiological and pathological significance to the transformation and metabolism of lipoprotein. This experiment is to tie the liver tissue of the animal model of the thoracic duct by feeding the normal diet SD rats and the high fat diet of SD rats. The morphological contrast observation of Apo-E immunoreactive cells was used to investigate the transport of Apo-E, and the effect of high fat feeding and experimental lymphatic stagnation on the morphological structure of liver tissue, and the morphological evidence was provided.
Method錛

本文編號：1977184