本文選題：超聲處理 + 冷凍　； 參考：《中國組織工程研究》2017年17期

【摘要】：背景:旁分泌在間充質(zhì)干細(xì)胞治療方面起主要作用。提取間充質(zhì)干細(xì)胞裂解液,可以避免直接間充質(zhì)干細(xì)胞本身所致栓塞、腫瘤以及免疫排斥反應(yīng)等問題,然而目前提取間充質(zhì)干細(xì)胞裂解液的方法存在差異。目的:比較超聲破碎及反復(fù)凍融方法獲得間充質(zhì)干細(xì)胞裂解液的差異。方法:(1)從健康的人腹部皮下脂肪中分離出脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞,經(jīng)貼壁篩選法純化細(xì)胞,胎牛血清培養(yǎng)基體外培養(yǎng)擴(kuò)增,并采用流式細(xì)胞檢測儀鑒定其常用表面標(biāo)記;(2)采用反復(fù)凍融及超聲細(xì)胞破碎2種破壁方法,將1×10~9 L~-1,2×10~9 L~-1,4×10~9 L~-1 3種不同密度的細(xì)胞分別置于生理鹽水與雙蒸水中進(jìn)行破碎,比較細(xì)胞破碎率及裂解液蛋白含量的差異。結(jié)果與結(jié)論:(1)通過體外分離人體脂肪組織,可獲得脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞;(2)細(xì)胞裂解時,細(xì)胞濃度越高,破壁所需時間越長,而破碎時間越長,則細(xì)胞破碎率越大;(3)生理鹽水中超聲細(xì)胞破碎法得到的蛋白含量較其他條件高;(4)結(jié)果提示在生理鹽水環(huán)境下使用超聲方法提取脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞裂解液尤為有效,且推薦細(xì)胞濃度為4×10~9 L~-1以內(nèi)。
[Abstract]:Background: paracrine plays a major role in the treatment of mesenchymal stem cells. The extraction of mesenchymal stem cell lysate can avoid the problems of embolization, tumor and immune rejection caused by direct mesenchymal stem cells. However, the methods of extracting mesenchymal stem cell lysate are different. Objective: to compare the differences between ultrasonic fragmentation and repeated freezing and thawing methods for obtaining mesenchymal stem cell lysate. Methods the adipose mesenchymal stem cells were isolated from healthy human abdominal subcutaneous fat. The cells were purified by adherent screening, and the fetal bovine serum medium was cultured and expanded in vitro. Flow cytometry was used to identify the surface marker of the two groups. By repeated freeze-thaw and ultrasonic cell breakage, the cells of different density of 1 脳 10 ~ (9) L ~ (-10) ~ (9) L ~ (1) Li ~ (-1) were placed in normal saline and double steam water respectively to break up the wall, and the cells with different densities were divided into two groups, one of them was treated with normal saline and the other was treated with double distilled water, and the cells with different densities were divided into two groups. The cell breakage rate and the protein content of lysate were compared. Results and conclusion: when adipose mesenchymal stem cells were isolated from human adipose tissue in vitro, the higher the cell concentration was, the longer it took to break down the wall and the longer the breaking time. The results showed that the ultrasonic method was particularly effective in extracting adipose mesenchymal stem cell lysate under normal saline. The recommended cell concentration was within 4 脳 10 9 L ~ (-1).
【作者單位】： 貴州醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院;解放軍第八五醫(yī)院上海肝病研究中心;貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院感染科;
【基金】：the Medical Innovation Project of the Nanjing Military Region,No.14ZX01 China Hepatitis Prevention and Treatment Foundation-Tian Qing Liver Research Fund Project,No.TQGB20150104~~
【分類號】：R329.2

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本文編號：1969233