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成年小鼠神經(jīng)干細胞培養(yǎng)、鑒定以及多不飽和脂肪酸含量的測定

發(fā)布時間:2018-05-26 08:26

  本文選題:神經(jīng)干細胞 + 神經(jīng)球; 參考:《南京醫(yī)科大學學報(自然科學版)》2017年04期


【摘要】:目的 :探討成年小鼠大腦室下區(qū)神經(jīng)干細胞(neural stem cells,NSCs)體外分離培養(yǎng)和鑒定的方法 ,測定體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞多不飽和脂肪酸n6/n3的比例和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)含量。方法:取8~10周齡的C57BL/6小鼠室下區(qū)細胞,進行體外懸浮培養(yǎng),觀察NSCs形成情況,免疫熒光鑒定NSCs干細胞特性及體外分化能力,氣相色譜鑒定NSCs的多不飽和脂肪酸含量中n6/n3比例及DHA含量。結(jié)果:體外培養(yǎng)的細胞可以增殖,并可以連續(xù)傳代;免疫熒光顯示神經(jīng)干細胞呈抗巢蛋白陽性,神經(jīng)干細胞在分化培養(yǎng)基培養(yǎng)時可分化為NeuN、TuJ1、GFAP、O4陽性細胞;神經(jīng)干細胞的多不飽和脂肪酸含量較鼠尾高。結(jié)論:采用無血清培養(yǎng)基成功獲得成年小鼠室下區(qū)的神經(jīng)干細胞,具有增殖、自我更新和分化的能力;神經(jīng)干細胞的n3多不飽和脂肪酸含量明顯高于鼠尾中的含量,且DHA多不飽和脂肪酸占較高比例。
[Abstract]:Objective: to investigate the method of isolation and identification of neural stem cells (NSCs) from subventricular area of adult mice in vitro, and to determine the proportion of polyunsaturated fatty acids (n6/n3) and the content of 22 carbohexaenoic acid (DHA) in cultured neural stem cells (NSCs). Methods: the cells in the subventricular region of C57BL/6 mice aged 8 ~ 10 weeks were cultured in vitro, the formation of NSCs was observed, and the characteristics and differentiation ability of NSCs stem cells were identified by immunofluorescence. The proportion of n6/n3 and the content of DHA in polyunsaturated fatty acids of NSCs were identified by gas chromatography. Results: the cells cultured in vitro could proliferate and could be subcultured continuously. Immunofluorescence showed that the neural stem cells were positive for anti-nestin, and the neural stem cells could be differentiated into Neun TuJ1 GFAPO4 positive cells when cultured in the differentiation medium. The content of polyunsaturated fatty acids in neural stem cells was higher than that in rat tail. Conclusion: the neural stem cells in the subventricular region of adult mice were successfully obtained by serum-free medium, which had the ability of proliferation, self-renewal and differentiation, and the content of n3 polyunsaturated fatty acids in neural stem cells was significantly higher than that in the tail of mice. And DHA polyunsaturated fatty acids accounted for a high proportion.
【作者單位】: 南京醫(yī)科大學江蘇省異種移植重點實驗室;南京醫(yī)科大學附屬淮安市第一人民醫(yī)院病理科;
【基金】:國家自然科學基金(81570402) 南京醫(yī)科大學科技發(fā)展基金(2011NJMU256)
【分類號】:R338

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