本文選題：成骨細(xì)胞 + TNF-α�。� 參考：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的：腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)是一類(lèi)炎癥因子，整合素β1是存在于細(xì)胞膜上的一中跨膜信號(hào)分子，一氧化氮（nitric oxide, NO）是一種短效自由基，這三種物質(zhì)在細(xì)胞活動(dòng)中發(fā)揮不同的生物作用。我們的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖橇私釺NF-α在成骨細(xì)胞活性、凋亡、整合素β1表達(dá)、NO代謝中的作用以及TNF-α與整合素β1對(duì)成骨細(xì)胞凋亡和NO代謝的影響。 方法： 1.運(yùn)用小鼠顱蓋骨原代培養(yǎng)鑒定和傳代的方法獲得生長(zhǎng)狀態(tài)良好的成骨細(xì)胞。 2.將TNF-α與α-MEM培養(yǎng)基配成混懸液，按0μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L的TNF-α濃度與成骨細(xì)胞共培養(yǎng)，按時(shí)間段分為24h和48h組。 3.按TNF-α濃度梯度和時(shí)間組用酶標(biāo)儀檢測(cè)成骨細(xì)胞活性和堿性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性。 4.按TNF-α濃度梯度和時(shí)間組采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)成骨細(xì)胞整合素β1的表達(dá)和凋亡，按格里思法檢測(cè)氧化氮的代謝產(chǎn)物——亞硝酸根離子（NO_2~-），代表NO的濃度。 5.使用整合素封閉劑封閉整合素β1，按TNF-α濃度梯度檢測(cè)成骨細(xì)胞凋亡，研究整合素和TNF-α的交互作用。 結(jié)果： 1.實(shí)驗(yàn)獲得的成骨細(xì)胞在3代時(shí)生長(zhǎng)狀態(tài)穩(wěn)定。成骨細(xì)胞進(jìn)行骨結(jié)節(jié)誘導(dǎo)和染色后，出現(xiàn)鈣化的骨結(jié)節(jié)。細(xì)胞活性較好適宜進(jìn)行藥物實(shí)驗(yàn)。 2.隨著TNF-α濃度的升高和培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，成骨細(xì)胞活性和堿性磷酸酶活性減低，凋亡增多。 3.48h，，TNF-α的濃度為10μg/L時(shí)NO_2~-含量達(dá)最大值；培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)NO_2~-的代謝含量維持在一個(gè)較高的濃度，與對(duì)照組有顯著性差異(P＜0.01)。 4.隨著TNF-α濃度的升高和培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，成骨細(xì)胞整合素β1表達(dá)減少。 5.整合素β1封閉后，共培養(yǎng)的TNF-α濃度的升高，成骨細(xì)胞凋亡較未封閉組增多；NO_2~-的濃度較未封閉組無(wú)明顯變化。 結(jié)論： 1. TNF-α可以降低成骨細(xì)胞活性和堿性磷酸酶活性，且具有一定的時(shí)間和濃度依賴(lài)性。 2.單一的TNF-α可以促進(jìn)成骨細(xì)胞NO的代謝和釋放，48h，TNF-α的濃度為10μg/L時(shí)，呈峰值表達(dá)；TNF-α可以誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡。整合素β1對(duì)成骨細(xì)胞NO代謝無(wú)明顯相關(guān)性。 3.成骨細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中，整合素β1的表達(dá)呈陽(yáng)性。高濃度TNF-α能夠抑制成骨細(xì)胞整合素β1的表達(dá)，具有濃度和時(shí)間依賴(lài)性。在誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡，整合素β1和TNF-α具有拮抗作用。
[Abstract]:Objective: tumor necrosis factor- 偽 (TNF- 偽) is a kind of inflammatory factor, integrin 尾 1 is a transmembrane signaling molecule in cell membrane, nitric oxide (no) is a kind of short-acting free radical. These three substances play different biological roles in cell activity. Our aim was to investigate the role of TNF- 偽 in osteoblast activity, apoptosis, integrin 尾 1 expression and no metabolism, and the effects of TNF- 偽 and integrin 尾 1 on osteoblast apoptosis and no metabolism. Methods: 1. Osteoblasts with good growth state were obtained by primary culture and subculture of mouse calvaria. 2. TNF- 偽 was mixed with 偽 -MEM medium to form suspension. TNF- 偽 was co-cultured with 100 渭 g / L TNF- 偽 at the concentration of 10 渭 g / L ~ 10 渭 g / L ~ (10) 渭 g 路L ~ (-1) and divided into 24 h and 48 h groups. 3. The activity of osteoblasts and alkaline phosphatase (ALP) were measured by enzyme labeling instrument according to TNF- 偽 concentration gradient and time group. 4. The expression and apoptosis of integrin 尾 1 in osteoblasts were detected by flow cytometry according to TNF- 偽 concentration gradient and time group. Nitrite ion, the metabolite of nitrogen oxide, was used to detect the expression and apoptosis of integrin 尾 1 in osteoblasts. 5. Using integrin sealant to block integrin 尾 1, osteoblast apoptosis was detected according to TNF- 偽 concentration gradient, and the interaction between integrin and TNF- 偽 was studied. Results: 1. The growth state of osteoblasts was stable at the third passage. After osteoblasts were induced and stained with bone nodules, calcified bone nodules appeared. Good cell activity is suitable for drug experiment. 2. With the increase of TNF- 偽 concentration and the prolongation of culture time, osteoblast activity and alkaline phosphatase activity decreased and apoptosis increased. When the concentration of TNF- 偽 was 10 渭 g / L at 3.48 h, the content of NO2- was the highest, and the metabolic content of NO2- was maintained at a higher concentration when the culture time was prolonged (P < 0.01). 4. With the increase of TNF- 偽 concentration and the prolongation of culture time, the expression of integrin 尾 1 in osteoblasts decreased. 5. After integrin 尾 1 was blocked, the concentration of TNF- 偽 in co-cultured cells increased, and the apoptosis of osteoblasts increased compared with the unblocked group. Conclusion: 1. TNF- 偽 decreased osteoblast activity and alkaline phosphatase activity in a time and concentration dependent manner. 2. When the concentration of TNF- 偽 was 10 渭 g / L, the peak expression of TNF- 偽 could induce apoptosis of osteoblasts. There was no significant correlation between integrin 尾 1 and no metabolism in osteoblasts. 3. The expression of integrin 尾 1 was positive in osteoblasts. High concentration of TNF- 偽 inhibited the expression of integrin 尾 1 in osteoblasts in a concentration and time dependent manner. Integrin 尾 1 and TNF- 偽 have antagonistic effects on osteoblast apoptosis.
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R363

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1890568