本文選題：肺癌 + 樹突狀細(xì)胞��； 參考：《泰山醫(yī)學(xué)院》2011年碩士論文

【摘要】：目的 肺癌作為全球范圍內(nèi)對人們健康威脅最大的腫瘤之一,輻射及化學(xué)藥物誘導(dǎo)細(xì)胞死亡(包括細(xì)胞凋亡和壞死)是目前已十分明確的一種治療癌癥的重要手段。近年來,隨著免疫學(xué)的發(fā)展,已有研究表明,以高溫、射線等手段處理腫瘤細(xì)胞引起其死亡的同時,腫瘤細(xì)胞表面表達(dá)可以引起機(jī)體免疫攻擊的蛋白分子,啟動免疫系統(tǒng)從而引起抗腫瘤免疫反應(yīng)。通過研究以輻射誘導(dǎo)的方法制備能被DC更好利用的腫瘤抗原,觀察并評價射線是否具有增強(qiáng)DC誘導(dǎo)的特異性CTL的抗腫瘤作用,以明確射線誘導(dǎo)細(xì)胞死亡與免疫應(yīng)答之間的相互作用過程及發(fā)生機(jī)制,為探索輻射聯(lián)合生物治療惡性腫瘤的新模式提供實驗依據(jù)。 方法 1、體外利用PBMC聯(lián)合應(yīng)用rhIL-4和rhGM-CSF培養(yǎng)樹突狀細(xì)胞DC,并用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表型。 2、采用Annexin-V-FITC/PI法檢測體外不同劑量X線照射后A549細(xì)胞凋亡率。 3、不同濃度的抗原沖擊未成熟DC,加入TNF-α促使imDC成熟,成熟后DC誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生特異性殺傷作用殺傷腫瘤細(xì)胞。 4、不同方法體外殺傷腫瘤細(xì)胞。 5、采用ELISA酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測各實驗組培養(yǎng)上清液中IL-12、IL-2、IFN-γ分泌水平。 結(jié)果 1、聯(lián)合應(yīng)用rhIL-4、rhGM-CSF與TNF-α。使用健康人外周血可誘導(dǎo)培養(yǎng)出成熟DC,細(xì)胞具有樹突狀細(xì)胞的典型形態(tài),經(jīng)流式檢測證實獲得的細(xì)胞為成熟DC。 2、A549細(xì)胞在一定照射劑量范圍內(nèi),凋亡率隨照射劑量的增加而升高。 3、采用不同濃度的抗原沖擊未成熟DC,其成熟后誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生特異性殺傷腫瘤細(xì)胞的能力有所不同。DC與抗原濃度比為1:10-1時DC誘導(dǎo)的CTL作用最強(qiáng)(0.2446±0.0490, P0.01)。 4、輻射聯(lián)合組與對照組、單純照射組、無抗原組、凍融組相比可以更好的殺傷腫瘤細(xì)胞(p0.01)。 5、聯(lián)合組培養(yǎng)上清液中IL-12、IL-2、IFN-γ明顯高于對照組(P0.01)。 結(jié)論 輻射誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡聯(lián)合DC介導(dǎo)的免疫應(yīng)答以清除腫瘤細(xì)胞的方法,能有效的激活免疫效應(yīng)細(xì)胞發(fā)揮作用,誘導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)分子表達(dá)等一系列反應(yīng),并創(chuàng)造適宜的抗腫瘤微環(huán)境,從而達(dá)到更確切的殺傷腫瘤的效果,成為治療肺癌的一條新途徑。
[Abstract]:Purpose Lung cancer is one of the most dangerous tumors in the world. Radiation and chemotherapy-induced cell death (including apoptosis and necrosis) is an important method to treat cancer. In recent years, with the development of immunology, it has been shown that when tumor cells die due to high temperature and radiation, the tumor cells express protein molecules that can cause immune attack. Activate the immune system to trigger an anti-tumor immune response. By studying the method of radiation-induced preparation of tumor antigens which can be used better by DC, we observed and evaluated whether the radiation enhanced the anti-tumor effect of specific CTL induced by DC. In order to clarify the interaction process and mechanism between radiation-induced cell death and immune response, it provides experimental basis for exploring a new mode of radiation combined with biological therapy for malignant tumors. Method 1. Dendritic cells were cultured by PBMC combined with rhIL-4 and rhGM-CSF in vitro, and the phenotypes were detected by flow cytometry. 2. Annexin-V-FITC/PI assay was used to detect the apoptosis rate of A549 cells after different doses of X-ray irradiation in vitro. (3) imDC maturation was induced by different concentrations of antigens, and T cells were induced to kill tumor cells by DC. 4. Different methods of killing tumor cells in vitro. 5. ELISA enzyme linked immunosorbent assay (Elisa) was used to detect the level of IL-12 and IL-2 IFN- 緯 in the supernatant of each experimental group. Result 1. RhIL-4 rhGM-CSF combined with TNF- 偽. Mature DCs can be induced by using healthy human peripheral blood. The cells have typical morphology of dendritic cells, and the cells obtained by flow cytometry are mature DCs. 2 the apoptosis rate of A549 cells increased with the increase of irradiation dose. 3. When different concentration of antigen was used to shock immature DCs, the ability of inducing T cells to produce specific cytotoxicity to tumor cells was different after maturation. When the ratio of DC to antigen concentration was 1: 10-1, DC could induce the strongest CTL effect (0.2446 鹵0.0490, P 0.01). 4, radiation combined group and control group, irradiation group, no antigen group, freeze-thaw group can kill tumor cells better than p0.01. 5. The levels of IL-12 and IL-2 IFN- 緯 in the culture supernatant of the combined group were significantly higher than those in the control group (P 0.01). Conclusion Radiation induced apoptosis of tumor cells combined with immune response mediated by DC to clear tumor cells can effectively activate immune effector cells and induce a series of responses such as immunomodulatory molecule expression. It is a new way to treat lung cancer by creating appropriate antitumor microenvironment so as to achieve more accurate effect of killing tumor.
【學(xué)位授予單位】：泰山醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R392

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本文編號：1870939