本文選題：髓樣分化蛋白-模擬肽　切入點：革蘭陰性菌　出處：《第三軍醫(yī)大學學報》2016年08期

【摘要】：目的探討髓樣分化蛋白-2模擬肽(MD-2 mimetic peptide,MDMP)對巨噬細胞吞噬革蘭陰性菌的影響及所致炎癥因子分泌的抑制效應。方法采用PCR從p EGFP-C3質粒中擴增出表達EGFP的基因片段,通過基因重組構建原核表達載體p ET-32a(+)-EGFP,經測序鑒定后,轉化至大腸桿菌BL21(DE3)PLys S中篩選出穩(wěn)定表達的重組菌p ET-32a(+)-EGFP-BL21(DE3)PLys S(簡稱為EGFPBL21)。以IPTG誘導重組質粒表達后,通過免疫熒光和流式細胞術檢測RAW264.7細胞對EGFP-BL21的吞噬能力以驗證EGFP-BL21的構建情況。進一步檢測RAW264.7細胞對經不同濃度MDMP(1.0、10、100μg/m L)預處理后的EGFP-BL21的吞噬效應;采用ELISA檢測細胞培養(yǎng)上清液中TNF-α和IL-6的分泌水平。結果篩選獲得穩(wěn)定表達EGFP的重組大腸桿菌BL21(DE3)PLys S,重組菌經巨噬細胞RAW264.7吞噬后流式和激光共聚焦檢測結果顯示細胞內出現(xiàn)明顯的綠色熒光。MDMP預處理后,流式檢測結果顯示RAW264.7細胞對EGFP-BL21的吞噬能力受到明顯抑制,預處理組(10、100μg/m L)的吞噬系數(PI)顯著低于經血清調理的陽性對照組(P0.01),且細胞培養(yǎng)上清TNF-α和IL-6的分泌水平顯著降低(P0.01)。結論 MDMP預處理可明顯抑制RAW264.7細胞對革蘭陰性菌的吞噬作用,并降低該過程中炎癥因子TNF-α和IL-6的分泌。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of myeloid differentiation protein 2 mimic peptide MD-2 mimetic peptidem on phagocytosis of gram-negative bacteria by macrophages and its inhibitory effect on the secretion of inflammatory factors.Methods the gene fragment expressing EGFP was amplified by PCR from p EGFP-C3 plasmid. The prokaryotic expression vector pET-32a (pET-32a) was constructed by gene recombination. After sequencing, the recombinant strain pET-32a (-EGFP-BL21DE3DE3PLys), which was stably expressed in Escherichia coli BL21(DE3)PLys S, was screened out.After the expression of recombinant plasmid was induced by IPTG, the phagocytic ability of RAW264.7 cells to EGFP-BL21 was detected by immunofluorescence and flow cytometry to verify the construction of EGFP-BL21.The phagocytic effect of RAW264.7 cells on EGFP-BL21 pretreated with different concentrations of MDMP1. 0 渭 g / mL and the levels of TNF- 偽 and IL-6 in the supernatant of cell culture were detected by ELISA.Results Recombinant Escherichia coli BL21(DE3)PLys Ss with stable expression of EGFP was obtained. After phagocytosis of recombinant Escherichia coli BL21(DE3)PLys Sby macrophage RAW264.7 and laser confocal detection, obvious green fluorescence was observed in the cells.The results of flow cytometry showed that the phagocytic ability of RAW264.7 cells to EGFP-BL21 was significantly inhibited, and the phagocytic coefficient of 10 100 渭 g / mL in pretreatment group was significantly lower than that of positive control group treated with serum (P 0.01), and the levels of TNF- 偽 and IL-6 in the supernatant of cell culture decreased significantly (P 0.01).Conclusion MDMP pretreatment can significantly inhibit the phagocytosis of RAW264.7 cells against Gram-negative bacteria and decrease the secretion of inflammatory cytokines TNF- 偽 and IL-6 during this process.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學藥學院藥理學教研室重慶市生物化學與分子藥理學重點實驗室;第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院全軍臨床病理學研究所;
【基金】：國家自然科學基金面上項目(81171848) 第三軍醫(yī)大學青年人才創(chuàng)新基金(SWH2011023)~~
【分類號】：R392

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