本文選題：酸性成纖維細胞生長因子　切入點：臍血　出處：《福建醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：【目的】 觀察酸性成纖維細胞生長因子(acid fibroblast growth factor,aFGF)對體外培養(yǎng)人臍血內(nèi)皮祖細胞(endothelial progenitor cells,EPCs)生物學(xué)功能及凋亡的響,進一步探討其作用機制。旨在為體外擴增EPCs尋找可能的誘導(dǎo)劑,從而獲取數(shù)量充足且功能良好的血管組織工程細胞。 【方法】 采用密度梯度離心法從人臍帶血獲取單個核細胞,貼壁法對細胞進行培養(yǎng)。用包含有VEGF和bFGF的M199培養(yǎng)液對貼壁細胞培養(yǎng)7d后,胰酶將貼壁細胞消化下來后供實驗用。并通過如下方法對EPCs進行鑒定:倒置顯微鏡下對細胞形態(tài)進行觀察;激光共聚焦顯微鏡對EPCs結(jié)合FITC-UEA-I和吞噬Dil-acLDL的功能進行鑒定;免疫組化檢測Ⅷ因子表達;流式細胞儀對細胞表面抗體CD34、VEGFR2、CD133進行測定。 培養(yǎng)7d后,收集貼壁細胞并將其隨機分成4組,并分別向不含有其它細胞生長因子的M199培養(yǎng)液中加入aFGF 0μg/L(對照組)、2μg/L、5μg/L、10μg/L分別干預(yù)培養(yǎng)6h、12h、24h、48h,再對細胞進行計數(shù)。CCK-8試劑盒、改良的Boyden小室法、貼壁法及流式細胞儀分別檢測aFGF對EPCs增殖、遷移、黏附功能及凋亡率的影響,24h后用RT-PCR技術(shù)檢測細胞Bcl-2 mRNA表達。對EPCs的數(shù)量及生物學(xué)功能用不同劑量aFGF干預(yù)后在不同時間點進行時效關(guān)系觀察,并進一步探討aFGF抑制EPCs凋亡的機制。 【結(jié)果】 密度梯度離心法獲取單個核細胞后,貼壁法可成功對細胞進行培養(yǎng),貼壁細胞通過鑒定證實為EPCs。與對照組比較,aFGF可以顯著提高EPCs的生物學(xué)功能并抑制其凋亡(P0.05);本研究5μg/L aFGF作用24h對EPCs多數(shù)生物學(xué)功能及凋亡抑制的影響最為顯著,其中黏附功能在aFGF 10μg/L作用12h后改善最為明顯(P0.05);在aFGF對EPCs作用24h后,與對照組比較,不同濃度的aFGF均可使人臍血EPCs的Bcl-2 mRNA表達效果顯著增強,其中5μg/L aFGF組效果最為顯著(P㩳0.05)。 【結(jié)論】 1.可利用密度梯度離心法從臍血內(nèi)分離的單個核細胞中培養(yǎng)出EPCs,貼壁法可對細胞進行培養(yǎng),貼壁細胞證實為EPCs。 2.aFGF可以提高EPCs的生物學(xué)功能并抑制其凋亡。 3.本研究,5μg/L aFGF作用24h對EPCs的多數(shù)生物學(xué)功能及抑制凋亡的影響最為顯著,其中黏附功能在aFGF 10μg/L作用12h后改善最為明顯。 4. aFGF對EPCs凋亡的抑制作用可能與上調(diào)凋亡抑制基因Bcl-2的表達有關(guān)。
[Abstract]:Purpose of the project

To investigate the biological function and apoptosis of endothelial progenitor cells ( EPCs ) in vitro cultured human umbilical cord blood endothelial progenitor cells ( EPCs ) , the mechanism of action of acidic fibroblast growth factor ( aFGF ) was investigated .

Methodology

Human umbilical cord blood was isolated from human umbilical cord blood by density gradient centrifugation . The cells were cultured with adherent cells . After 7 days culture of adherent cells with M199 medium containing VEGF and bFGF , the cells were digested by trypsin . The functions of EPCs were examined under inverted microscope . The expression of FITC - UEA - I and phagocytotic Dil - acLDL were detected by laser confocal microscope . The expression of factor 鈪，

本文編號：1709496