本文選題：干擾素　切入點(diǎn)：轉(zhuǎn)基因小鼠　出處：《吉林大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：干擾素是一種當(dāng)機(jī)體受到相應(yīng)誘導(dǎo)物刺激后由細(xì)胞分泌的具有抗病毒活性的蛋白質(zhì)。干擾素通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生有酶活性的抗病毒蛋白,間接地抑制病毒復(fù)制而具有抗病毒作用;干擾素還有抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用。一般而言,當(dāng)細(xì)胞受到病毒或雙鏈RNA的刺激時(shí)就會(huì)產(chǎn)生IFN-α和IFN- ?。但在不同的生物體內(nèi)的不同組織器官的細(xì)胞中干擾素的產(chǎn)生量都是不同的。大多數(shù)臨床治療中使用的干擾素都是通過(guò)基因工程產(chǎn)生的。前期的生物治療研究證明,IFN-α為后來(lái)的很多新的生物治療藥物的發(fā)展鋪平了道路。 本研究用PvuI酶切IRES-neo-IFN質(zhì)粒,回收并純化目的基因,通過(guò)受精卵顯微注射技術(shù),將其導(dǎo)入到昆明小鼠受精卵的雄原核中,約注射了864枚受精卵,將823枚存活的受精卵移植到33只假孕雌鼠的輸卵管壺腹部?jī)?nèi),其中有15只懷孕,順利出生并存活的仔鼠有31只,通過(guò)特異性引物PCR法和Southern雜交法檢測(cè)出4只陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因小鼠。原代轉(zhuǎn)基因小鼠與正常的昆明小鼠交配,出生后代經(jīng)PCR檢測(cè),篩選出F1代轉(zhuǎn)基因小鼠。F1代轉(zhuǎn)基因小鼠的整合率為49.3%(35/71只)。應(yīng)用人IFN-α檢測(cè)試劑盒對(duì)F1代PCR陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行了體內(nèi)人IFN-α蛋白表達(dá)情況的分析。收集陽(yáng)性小鼠血清,用ELISA方法檢測(cè)出3個(gè)轉(zhuǎn)基因鼠系均有人IFN-α表達(dá)。通過(guò)本研究初步表明,我們所構(gòu)建的IRES-neo-IFN表達(dá)載體不僅能夠指導(dǎo)人IFN-α在原代小鼠中高效表達(dá),并能夠在后代中穩(wěn)定的遺傳和表達(dá)。本研究成功建立了表達(dá)人IFN-α基因的轉(zhuǎn)基因小鼠,為干擾素抗病毒機(jī)制的研究及為其他動(dòng)物進(jìn)行抗病毒感染基因工程育種研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Interferon is an antiviral protein secreted by cells when the body is stimulated by the corresponding inducer.Interferon has antiviral effects by inducing the production of antiviral proteins with enzyme activity, which indirectly inhibits viral replication, and also has anti-tumor and immunomodulatory effects.In general, IFN- 偽 and IFN- 偽 are produced when cells are stimulated by viruses or double-stranded RNA.But the amount of interferon produced in different tissues and organs of different organisms is different.Interferon used in most clinical treatments is produced by genetic engineering.Previous biotherapy studies have demonstrated that IFN- 偽 paved the way for the development of many new biotherapeutic drugs.In this study, the IRES-neo-IFN plasmid was digested with PvuI, and the target gene was recovered and purified. By microinjection of fertilized eggs, the plasmid was introduced into the male prokaryotic of Kunming mouse fertilized eggs, and about 864 fertilized eggs were injected.Eight hundred and twenty-three surviving fertilized eggs were transplanted into the ampulla of 33 pseudopregnant female rats. Among them, 15 were pregnant and 31 were born and survived successfully. Four positive transgenic mice were detected by specific primer PCR and Southern hybridization.The primary transgenic mice were mated with normal Kunming mice. After birth, the integration rate of F1 transgenic mice and F1 generation transgenic mice was 49.3% and 35 / 71 respectively.The expression of human IFN- 偽 protein in F1 generation PCR positive transgenic mice was analyzed by human IFN- 偽 detection kit.Positive mouse serum was collected and IFN- 偽 expression was detected by ELISA.The results showed that the constructed IRES-neo-IFN expression vector could not only direct the expression of human IFN- 偽 in primary mice, but also be stable in the inheritance and expression of human IFN- 偽 in offspring.In this study, transgenic mice expressing human IFN- 偽 gene were successfully established, which laid a foundation for the study of antiviral mechanism of interferon and genetic engineering breeding of other animals for anti-virus infection.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類(lèi)號(hào)】：R-332

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本文編號(hào)：1703336