本文選題：胱硫醚β-合成酶　切入點(diǎn)：胱硫醚β-裂解酶　出處：《中國(guó)生物工程雜志》2017年02期

【摘要】：以釀酒酵母基因組為模板通過(guò)PCR分別擴(kuò)增胱硫醚β合成酶(cystathionine β-synthase,CBS)和胱硫醚β-裂解酶(cystathionine β-lyase,CBL)目的基因片段,經(jīng)無(wú)縫克隆構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化大腸桿菌菌株E.coli BL21(DE3)。經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)和純化后,重組蛋白的純度均達(dá)到90%,回收率均達(dá)到80%,可溶表達(dá)量分別為26 mg/L和332 mg/L。經(jīng)催化活性測(cè)定,CBS的單位酶活為15 U/mg,CBL的單位酶活為72 U/mg。在此基礎(chǔ)上初步開(kāi)發(fā)了循環(huán)酶法同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)檢測(cè)試劑盒,實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明該試劑盒的有效性和穩(wěn)定性均符合體外診斷檢測(cè)的要求,其檢測(cè)性能與市售進(jìn)口同類(lèi)試劑盒基本一致。
[Abstract]:The Saccharomyces cerevisiae genome as template by PCR were amplified by cystathionine beta synthase (cystathionine beta -synthase, CBS) and cystathionine beta lyase (cystathionine beta -lyase, CBL) gene fragments by seamless cloning plasmid was constructed and transformed into E.coli Strain E.coli (BL21 DE3). After induced expression and purification, the purity of recombinant protein reached 90%, the recovery rate reached 80%, the soluble expression levels were 26 mg/L and 332 mg/L. by catalytic activity, the enzyme activity of CBS units for 15 U/mg units, the enzyme activity of CBL was 72 U/mg. on the basis of the initial development of enzymatic cycling homocysteine (homocysteine, Hcy) test kit, experimental results show that the detection requirements of validity of the kit and stability are in accordance with body outside diagnosis, its detection performance with the commercially imported kit is basically the same.

【作者單位】： 吳江近岸蛋白質(zhì)科技有限公司研發(fā)部;復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院遺傳工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【分類(lèi)號(hào)】：R392-33

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1655570