本文選題：膽固醇　切入點：脂肪因子　出處：《中南大學(xué)》2012年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的 觀察脂肪細(xì)胞游離膽固醇過負(fù)荷對成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞分泌脂肪因子的影響,并初步探討其機(jī)制。同時觀察干預(yù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對小鼠脂肪因子分泌的影響,并初步探討其機(jī)制。 方法 一.脂肪細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對3T3-L1細(xì)胞脂肪因子分泌的影響及機(jī)制 體外培養(yǎng)3T3-L1脂肪前體細(xì)胞,用雞尾酒法促分化為成熟脂肪細(xì)胞,觀察細(xì)胞形態(tài)的變化,并用油紅O染色鑒定脂肪細(xì)胞。分別以不同濃度(0-100ug/ml)的氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)和酯酰輔酶A-膽固醇脂酰轉(zhuǎn)移酶(ACAT)抑制劑Sandoz58035(10ug/ml)干預(yù)48小時：以ox-LDL(50ug/ml)加ACAT抑制劑(10ug/ml)干預(yù)不同時間(0-48小時)；以ox-LDL (50ug/ml)加ACAT抑制劑(10ug/ml)和不同濃度(0-20mM)的4-苯丁酸鈉(4-PBA)共同孵育脂肪細(xì)胞48小時。用ox-LDL (50ug/ml)加ACAT抑制劑(10ug/ml)處理細(xì)胞46小時后再加NF-κB通路的阻斷劑PS1145(10μ mol/L)干預(yù)2h。Western Blot法檢測總蛋白Grp78和CHOP及胞核蛋白NF-κ B的表達(dá)；Real-timePCR檢測脂肪因子脂聯(lián)素(adiponectin)、抵抗素(resisitin)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和單核趨化蛋白-1(MCP-1)mRNA的表達(dá)；用ELISA法檢測細(xì)胞上清液脂肪因子脂聯(lián)素、抵抗素、TNF-α和MCP-1的表達(dá)。 二.脂肪細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對小鼠脂肪因子分泌的影響及機(jī)制 隨機(jī)將C57BL/6野生型小鼠分為4組(n=40)：高脂飲食喂養(yǎng)加4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA)干預(yù)組(簡稱4-PBA干預(yù)組)、高脂飲食喂養(yǎng)加共軛�；撬嵝苋パ跄懰�(tauroursodeoxycholic acid, TUDCA)干預(yù)組(簡稱TUDCA干預(yù)組)、高脂飲食喂養(yǎng)組(簡稱高脂飲食組)和標(biāo)準(zhǔn)飲食對照組(簡稱對照組),每組10只。高脂飲食喂養(yǎng)C57BL/6小鼠8周后,分別予4-PBA20mg·kg-1.d-1, TUDCA0.5g.kg-1.d-1灌胃治療6周。用HE染色觀察小鼠脂肪組織切片形態(tài)學(xué)變化；用Real-timePCR法半定量測定脂肪組織中脂肪因子脂聯(lián)素(adiponectin)、抵抗素(resisting腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和單核趨化蛋白-1(MCP-1)mRNA的表達(dá)；同時用ELISA法檢測血清脂肪因子脂聯(lián)素、抵抗素、TNF-α和MCP-1蛋白的分泌；并檢測血總膽固醇(total cholesterol, TC)、甘油三酯(triglyceride, TG)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein-cholesterol LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein-cholesterol HDL-C)水平及血糖水平。用western Blot法檢測脂肪組織總蛋白Grp78和CHOP的表達(dá)及細(xì)胞核NF-κB蛋白的表達(dá)。 結(jié)果 一.脂肪細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對3T3-L1細(xì)胞脂肪因子分泌的影響及機(jī)制 1.不同濃度的ox-LDL (0-100ug/ml)加ACAT抑制劑處理脂肪細(xì)胞48h后,隨著ox-LDL濃度的增加,脂肪細(xì)胞內(nèi)游離膽固醇的濃度遞增。與對照組(ox-LDL Oug/ml)比較,各干預(yù)組細(xì)胞內(nèi)游離膽固醇的濃度均明顯增加,差異有顯著性(P0.05)。 2.不同濃度的ox-LDL (0-100ug/ml)加ACAT抑制劑干預(yù)脂肪細(xì)胞48h后,隨著ox-LDL濃度的增加,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物GRP78、CHOP蛋白表達(dá)顯著升高,與對照組(ox-LDL Oug/ml)比較,差異有顯著性(P0.05)；ox-LDL (50ug/ml)和ACAT抑制劑干預(yù)脂肪細(xì)胞不同時間(0-48h)后,脂肪細(xì)胞GRP78、CHOP蛋白表達(dá)隨干預(yù)時間的延長而增加,與對照組(0h)比較,差異有顯著性(P0.05)。 3.不同濃度的ox-LDL (0-100ug/ml)加ACAT抑制劑干預(yù)脂肪細(xì)胞48h后,隨著ox-LDL濃度的增加,脂肪細(xì)胞的脂聯(lián)素mRNA表達(dá)顯著降低,細(xì)胞上清液脂聯(lián)素分泌顯著減少(P0.05)；抵抗素、TNF-α和MCP-1mRNA表達(dá)顯著及細(xì)胞上清液脂聯(lián)素分泌顯著增加(P0.05)。ox-LDL (50ug/ml)和ACAT抑制劑干預(yù)脂肪細(xì)胞不同時間(0-48h)后,隨干預(yù)時間延長,脂肪細(xì)胞的脂聯(lián)素mRNA表達(dá)顯著降低,細(xì)胞上清液脂聯(lián)素分泌顯著減少(P0.05)；抵抗素、TNF-α和MCP-1mRNA表達(dá)及細(xì)胞上清液蛋白分泌顯著增加(P0.05),與對照組比較,差異有顯著性(P0.05)。 4. ox-LDL (50ug/ml)、ACAT抑制劑和不同濃度(0-20mM)4-PBA干預(yù)48小時后,脂肪細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物GRP78及CHOP蛋白表達(dá)水平降低,脂聯(lián)素分泌水平升高,抵抗素、TNF-α和MCP-1分泌水平逐漸減少,與對照組(OmM)比較,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。 5. ox-LDL (50ug/ml)和ACAT抑制劑干預(yù)脂肪細(xì)胞46h后,加NF-κB通路的阻斷劑PS1145(10μ mol/L)2h后,細(xì)胞核NF-κB蛋白表達(dá)減少,抵抗素、TNF-α和MCP-1mRNA水平減少,與對照組比較,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。 二.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對小鼠脂肪因子分泌的影響及機(jī)制 1.高脂飲食喂養(yǎng)8周后,與對照組相比,小鼠體重逐漸增加,小鼠附睪脂肪組織切片顯示高脂喂養(yǎng)組的脂肪細(xì)胞明顯增大；血漿甘油三酯及膽固醇顯著的增高(P0.05)；空腹血糖也顯著的升高(P0.05)；與對照組相比,附睪脂肪組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物Grp78及CHOP蛋白表達(dá)顯著升高。 2.高脂飲食喂養(yǎng)8周加4-PBA和TUDCA干預(yù)6周后,與高脂飼料組相比,4-PBA和TUDCA干預(yù)組小鼠體重減輕,小鼠附睪脂肪組織的脂肪細(xì)胞體積減��；血漿甘油三酯及膽固醇顯著的降低(P0.05)；空腹血糖也降低,差異有顯著性(P0.05)。 3.高脂飲食喂養(yǎng)8周加4-PBA和TUDCA干預(yù)6周后,4-PBA和TUDCA干預(yù)組小鼠附睪脂肪組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物GRP-78和CHOP蛋白的表達(dá)較高脂飼養(yǎng)組顯著降低,差異有顯著性(P0.05)；各組小鼠脂肪組織中脂肪因子脂聯(lián)素、抵抗素、TNF-α、MCP-1的mRNA無顯著差異,但4-PBA和TUDCA干預(yù)組小鼠血清中脂聯(lián)素分泌增加而抵抗素分泌減少(P0.05),炎癥因子TNF-α、MCP-1水平無顯著差異。 4.肥胖小鼠附睪脂肪組織胞核蛋白NF-κB的表達(dá)較對照組相比顯著的增強；4-PBA和TUDCA干預(yù)肥胖小鼠,胞核蛋白NF-κB的表達(dá)較高脂飼料組顯著的降低,差異均具有統(tǒng)計學(xué)差異(P均0.05)。 結(jié)論 1.用ox-LDL和ACAT抑制劑干預(yù)后可使脂肪細(xì)胞內(nèi)游離膽固醇含量增加。 2.膽固醇過負(fù)荷可抑制脂肪細(xì)胞表達(dá)和分泌脂聯(lián)素,促進(jìn)抵抗素、TNF-α和MCP-1的表達(dá)和分泌,這種影響呈時間依賴性和濃度依賴性。 3.膽固醇過負(fù)荷使脂肪細(xì)胞分泌譜的炎性改變可能與其增強脂肪細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān)。抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可以改善脂肪細(xì)胞分泌譜。 4. IKK/NF-κB通路可能參與了游離膽固醇誘導(dǎo)產(chǎn)生的脂肪細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時的細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)。 5.高脂飼養(yǎng)的C57BL/6小鼠導(dǎo)致肥胖,脂肪細(xì)胞肥大,糖脂代謝異常。且脂肪組織出現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激增強,脂肪因子的分泌水平均呈炎性改變,即脂聯(lián)素水平降低,抵抗素、TNF-α、MCP-1分泌增加。 6.化學(xué)伴侶抑制劑干預(yù)肥胖小鼠體內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可以減輕肥胖小鼠的體重,抑制脂肪細(xì)胞肥大,改善糖脂代謝異常,同時改善脂肪分泌的炎性因子譜,即減少肥胖所致脂聯(lián)素水平的降低,抑制抵抗素的分泌,但對炎癥因子TNF-α、MCP-1水平無明顯影響。 7.肥胖小鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激調(diào)節(jié)脂肪因子分泌譜的變化,可能與IKK/NF-κB炎癥通路的激活相關(guān)。
[Abstract]:objective
Objective To observe the effect of free cholesterol overload on adipokine secretion in mature 3T3-L1 adipocytes, and to explore its mechanism. Meanwhile, we observed the effect of intervention on endoplasmic reticulum stress on adipokine secretion in mice, and preliminarily explored its mechanism.
Method
The effect and mechanism of adipocyte endoplasmic reticulum stress on the secretion of adipose factor in 3T3-L1 cells
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本文編號：1612878