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沉默ski基因?qū)Υ笫笮切文z質(zhì)細胞遷移的影響

發(fā)布時間:2018-02-04 04:04

  本文關(guān)鍵詞: ski RNA干擾 星形膠質(zhì)細胞 Transwell細胞遷移實驗 劃痕實驗 大鼠 出處:《中國康復理論與實踐》2017年08期  論文類型:期刊論文


【摘要】:目的研究ski基因在大鼠星形膠質(zhì)細胞遷移過程中的作用。方法分離大鼠腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細胞,體外培養(yǎng)。合成ski基因和陰性對照小干擾片段。設置ski-siRNA轉(zhuǎn)染組、陰性對照組和空白對照組。采用脂質(zhì)體法將特異性針對ski基因的siRNA和陰性對照siRNA轉(zhuǎn)入大鼠星形膠質(zhì)細胞。采用Western blotting檢測各組ski蛋白的表達水平;采用Transwell細胞遷移實驗和細胞劃痕實驗檢測ski-siRNA轉(zhuǎn)染后星形膠質(zhì)細胞遷移能力的變化。結(jié)果與空白對照組和陰性對照組比較,ski-siRNA轉(zhuǎn)染組細胞內(nèi)ski蛋白的相對表達水平顯著降低(F=132.957,P0.001)。Transwell細胞遷移實驗發(fā)現(xiàn),ski-siRNA轉(zhuǎn)染組每孔遷移細胞數(shù)少于空白對照組和陰性對照組(F47.197,P0.05)。細胞劃痕實驗顯示,轉(zhuǎn)染組細胞1~5 d的劃痕愈合率均明顯低于對照組(F69.187,P0.01)。結(jié)論沉默ski基因能顯著抑制星形膠質(zhì)細胞的遷移能力,ski可能參與星形膠質(zhì)細胞的轉(zhuǎn)移過程,進而調(diào)控膠質(zhì)瘢痕的形成。
[Abstract]:Objective to study the role of ski gene in the process of astrocyte migration in rats. In vitro culture. Ski gene and negative control small interference fragments were synthesized. Ski-siRNA transfection group was set up. Negative control group and blank control group. SiRNA specific to ski gene and negative control siRNA were transferred into astrocytes of rats by liposome method. Western was used. The expression of ski protein was detected by blotting. The migration ability of astrocytes after transfection of ski-siRNA was detected by Transwell cell migration assay and cell scratch assay. The results were compared with those of blank control group and negative control group. The relative expression level of ski protein in the ski-siRNA transfected cells was significantly decreased by the migration assay of FN 132.957 (P0.001) .Transwell cells. The number of migration cells per well in ski-siRNA transfection group was less than that in blank control group and negative control group. The rate of scratch healing was significantly lower in transfection group than that in control group. Conclusion silencing ski gene can significantly inhibit the migration ability of astrocytes. Ski may be involved in the process of astrocyte metastasis and thus regulate the formation of glial scar.
【作者單位】: 蘭州大學第二醫(yī)院骨科;甘肅省骨關(guān)節(jié)疾病研究重點實驗室;第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所三室創(chuàng)傷燒傷與復合傷國家重點實驗室;
【基金】:國家自然科學基金項目(No.30772299) 蘭州大學第二醫(yī)院科研基金項目(No.sdkyjj-04)
【分類號】:R3416
【正文快照】: 星形膠質(zhì)細胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous1.2方法system,CNS)中數(shù)量最多、分布最廣的膠質(zhì)細胞,在1.2.1原代大鼠星形膠質(zhì)細胞的培養(yǎng)、純化和鑒定維持CNS內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、營養(yǎng)支持神經(jīng)元、CNS創(chuàng)傷后大鼠在75%酒精中浸泡消毒,-20℃冰箱冷凍麻的功能修復等方面具有重要調(diào)節(jié)作用[1-

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