本文關鍵詞： 尼帕腦炎病毒 G蛋白 F蛋白 DNA疫苗 體液免疫 細胞免疫　出處：《中國農(nóng)業(yè)科學院》2012年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：尼帕病腦炎是由尼帕病毒（Nipah Virus，NiV）引起的一種烈性人畜共患病。1999年以來，馬來西亞、新加坡、孟加拉國、印度等東南亞、南亞國家先后爆發(fā)尼帕病腦炎，，人類感染死亡率達40％以上。NiV屬副粘病毒科亨尼帕病毒屬，其自然宿主為果蝠，在東南亞及我國南方地區(qū)廣泛分布。近年，我國南方部分地區(qū)的果蝠體內(nèi)已檢測到尼帕病毒抗體的存在，提示尼帕病毒已對我國的公共衛(wèi)生構成現(xiàn)實的威脅。目前，尼帕病腦炎尚無有效治療方法，研制安全有效的疫苗，具有重要意義。 DNA疫苗能夠刺激機體產(chǎn)生較全面的免疫反應，和滅活疫苗、減毒疫苗、亞單位疫苗相比，具有獨特的優(yōu)勢。NiV的囊膜糖蛋白G和F是誘導中和抗體的主要免疫原。本研究利用分別表達G和F蛋白的真核表達質(zhì)粒pCAGG-NiVG和pCAGG-NiVF單獨或聯(lián)合免疫BALB/c小鼠兩次；免疫小鼠的體液免疫反應采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）和水泡性口炎病毒嵌合NiV囊膜糖蛋白G/F蛋白偽型病毒粒子（VSV△G*F/G）分別檢測小鼠血清中NiV特異性IgG抗體和中和抗體水平；為了檢測免疫小鼠的細胞免疫水平，本研究利用NiV F蛋白CD8+T細胞表位（VYFPILTEI,H2Kd）多肽為刺激物采用流式細胞術（FCM）和酶聯(lián)免疫斑點實驗（ELISPOT）檢測pCAGG-NiVF免疫小鼠的的特異性CD8+T細胞免疫反應。 本研究結果顯示pCAGG-NiVG和pCAGG-NiVF單獨免疫小鼠，初次免疫后即可誘導產(chǎn)生NiV特異性IgG抗體和中和抗體；加強免疫后這兩種抗體水平顯著上升（p0.05）。pCAGG-NiVG和pCAGG-NiVF誘導相似水平的ELISA抗體和中和抗體，聯(lián)合免疫組與單獨免疫組小鼠相比體液免疫水平?jīng)]有顯著區(qū)別（p0.05）。FCM和ELISPOT檢測結果顯示pCAGG-NiVF初次免疫小鼠后即能夠產(chǎn)生良好的特異性CD8+T細胞免疫應答，且該細胞免疫反應在小鼠二次免疫后顯著增強（p0.05）。 表達NiV G和F蛋白的DNA疫苗能夠誘導小鼠產(chǎn)生特異性體液免疫和細胞免疫反應，在小鼠上具有良好的免疫原性，是一種有希望的尼帕病腦炎候選疫苗。
[Abstract]:Nipa encephalitis is a severe zoonosis caused by Nipah virus. Since 1999, Malaysia, Singapore, Bangladesh, India and other Southeast Asia. Nipa disease encephalitis has been outbreak in South Asian countries, and the mortality rate of human infection is more than 40%. NiV belongs to the genus Cohenipa virus of paramyxovirus, and its natural host is fruit bat. It is widely distributed in Southeast Asia and southern China. In recent years, the presence of Nippa virus antibodies has been detected in fruit bats in parts of southern China. It is suggested that Nipavirus has posed a real threat to public health in China. At present, there is no effective treatment for Nipah's encephalitis, and it is of great significance to develop a safe and effective vaccine. DNA vaccine can stimulate the body to produce a more comprehensive immune response, compared with inactivated vaccine, attenuated vaccine, subunit vaccine. In this study, the eukaryotic expression plasmids pCAGG-NiVG and pCAG, which expressed G and F proteins respectively, were used to induce neutralizing antibodies. BALB/c mice were immunized with G-NiVF alone or in combination twice. Humoral immune response of immunized mice by enzyme linked immunosorbent assay (Elisa) and vesicular stomatitis virus chimeric NiV envelope glycoprotein G / F protein pseudoviral particle. The levels of NiV specific IgG antibody and neutralizing antibody in serum of mice were detected respectively. In order to detect the cellular immunity of immunized mice, the NiV F protein CD8 T cell epitope VYFPILTEI was used in this study. H2KD polypeptide was stimulated by flow cytometry (FCM) and enzyme-linked immunoblot assay (ELISPOT). The specific CD8 T cell immune response of mice immunized with pCAGG-NiVF was detected. The results showed that mice immunized with pCAGG-NiVG and pCAGG-NiVF alone could induce the production of NiV specific IgG antibody and neutralizing antibody after primary immunization. The levels of these two antibodies increased significantly after immunization. PCAGG-NiVG and pCAGG-NiVF induced similar levels of ELISA antibodies and neutralizing antibodies. There was no significant difference in humoral immunity level between the combined immunization group and the single immunization group (p 0.05). The results of FCM and ELISPOT showed that the mice immunized with pCAGG-NiVF for the first time could produce a good specific CD8 T cell immune response. The cellular immune reaction was significantly increased after the second immunization in mice. The DNA vaccine expressing NiV G and F proteins can induce specific humoral and cellular immune responses in mice and has good immunogenicity in mice. Is a promising candidate vaccine for Nippa's encephalitis.
【學位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R392

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