發(fā)布時間：2018-01-25 13:14

  本文關鍵詞： 氦氖激光 人胚肺二倍體成纖維細胞 端粒長度 實時熒光定量PCR　出處：《廣西醫(yī)科大學》2012年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：本實驗將體外培養(yǎng)的人胚肺二倍體成纖維細胞(Human fetal lung diploid fibroblasts2BS)作為細胞衰老模型,開展低強度激光對成纖維細胞端粒DNA長度影響的實驗研究。采用不同輻照時間、不同輻照功率的低強度激光輻照實驗組細胞即年輕人胚肺二倍體成纖維細胞,用四甲基偶氮唑鹽(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltrazolium bromide MTT)比色法檢測激光照射處理對細胞生長和增值的影響；采用相對定量實時熒光聚合酶鏈式反應(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction q-PCR)方法檢測細胞端粒DNA相對長度。結果如下： (1)MTT比色法檢測細胞生長與增值的結果顯示,激光照射后,實驗組(即激光照射組)(功率2-5mmw)細胞生長趨勢顯著優(yōu)于對照組(非激光照射組)(P0.05)；提示激光照射對細胞生長不但沒有對細胞造成負影響,而是促進細胞生長。 (2) q-PCR檢測細胞端粒DNA長度顯示：對照組中,老年2BS細胞端粒DNA長度較年輕2BS細胞端粒DNA短(P0.05),進一步驗證細胞端粒DNA長度隨著代齡的增加而縮短,從而也說明了端粒與細胞衰老息息相關。實驗組中,老年細胞(2BS細胞在年輕時經(jīng)激光照射后傳代至老年時)的端粒長度較對照組的老年細胞端粒長度長(P0.05)。提示,經(jīng)適當激光照射后,細胞端粒DNA因衰老而變短的趨勢得到減緩。本研究從基因水平上為探討低強度激光延緩細胞衰老的激光生物效應提供實驗依據(jù)。 本實驗首次將激光照射應用于人類細胞衰老模型,同時運用最簡便、快捷、專一、靈敏、可重復性強的檢測細胞端粒DNA長度的方法——實時熒光定量PCR方法來檢測細胞端粒DNA長度,提供低強度激光延緩細胞衰老的生物物理學實驗依據(jù)和生物分子學理論基礎,在細胞基因水平上探討低強度激光的抗衰老機理。同時,通過實驗篩選有生物意義的激光參數(shù),為低強度激光在延長細胞壽命、預防及降低與年齡相關性疾病的發(fā)生等方面的應用提供新途徑和新技術。
[Abstract]:In this study, human fetal lung diploid fibroblast 2BS (BSs) of human fetal lung diploid fibroblasts cultured in vitro was used as the model of cell senescence. The effects of low intensity laser on the length of telomere DNA of fibroblasts were studied. The experimental group cells were irradiated with low intensity laser with different irradiation power, I. e., diploid fibroblasts of young embryo lung, treated with tetramethylazolium trimethylazolium. 5-Dimethylthiazol-2-yll-2. The effects of laser irradiation on cell growth and proliferation were detected by 5-diphenyltrazolium bromide MTT colorimetry. The relative quantitative real-time fluorescence polymerase chain reaction (. Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction q-PCR). Methods the relative length of telomere DNA was measured. The results were as follows: Cell growth and proliferation were detected by MTT colorimetry. The growth trend of the cells in the experimental group (i.e. the laser irradiation group) (power 2-5mmw) was significantly better than that in the control group (non-laser irradiation group). The results suggest that laser irradiation not only has no negative effect on cell growth, but also promotes cell growth. The length of telomere DNA was detected by q-PCR: in the control group, the telomere DNA length of the aged 2BS cells was shorter than that of the younger 2BS cells (P 0.05). Further verify that the length of telomere DNA is shortened with the increase of age, which also shows that telomere is closely related to cell senescence. The telomere length of the geriatric cells was longer than that of the control group (P 0.05). It suggested that the telomere length of the geriatric cells after laser irradiation was higher than that of the control group (P 0.05). The results suggested that the telomere length of the geriatric cells was higher than that of the control group. The trend of telomere DNA shortening due to aging has been slowed down. This study provides an experimental basis for the study of laser biological effects of low-intensity laser on delaying cell senescence at the gene level. In this experiment, laser irradiation was applied to human aging model for the first time, and it was the most convenient, rapid, specific and sensitive. A reproducible method for detecting the length of telomere DNA in cells-real-time fluorescent quantitative PCR method is used to detect the length of telomere DNA. To provide the experimental basis of biophysics and biomolecular theory of low-intensity laser to delay cell senescence, and to explore the anti-aging mechanism of low-intensity laser on the level of cell gene. In order to provide new approaches and techniques for the application of low intensity laser in prolonging cell life, preventing and reducing the occurrence of age-related diseases and so on.
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R329

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本文編號：1462929