本文關鍵詞：德國小蠊變應原Bla g 2單克隆抗體的制備與鑒定　出處：《中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志》2017年04期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的制備德國小蠊(Blattella germanica)變應原Bla g 2的單克隆抗體并鑒定其特異性。方法以純化的0.2 mg/ml Bla g 2蛋白溶液為抗原免疫雌性BLAB/c小鼠6只,免疫4次,每次間隔1周。免疫后第5天取小鼠尾靜脈血,制備小鼠血清,第6天加強免疫1次,第7天處死小鼠取脾臟,制備脾細胞懸液。測定小鼠抗血清滴度,運用雜交瘤技術將免疫脾細胞與骨髓瘤細胞融合,采用有限稀釋法對陽性孔雜交瘤細胞進行克隆化。蛋白質印跡(Western blotting)檢測單克隆抗體特異性,間接ELISA測定單克隆抗體效價,雙抗夾心ELISA鑒定單克隆抗體的亞型。結果在小鼠血清稀釋至1∶16 000時A450值仍0.100,判斷為免疫成功。通過雜交瘤技術獲得2株能穩(wěn)定分泌Bla g 2單克隆抗體的雜交瘤細胞,標記為Bla g 2-1、Bla g 2-2。Western blotting結果表明,Bla g 2-1和Bla g 2-2單克隆抗體對Bla g 2蛋白均具有高度特異性。間接ELISA測得2株單克隆抗體的效價分別為Bla g 2-1(1∶16 000)、Bla g 2-2(1∶8 000)。雙抗夾心ELISA結果表明單克隆抗體蛋白亞類均為免疫球蛋白G1(IgG1)。結論制備的德國小蠊變應原單克隆抗體Bla g 2能與Bla g 2蛋白發(fā)生特異性結合。
[Abstract]:Objective to prepare Blattella germanica from Blattella germanica. Methods six female BLAB/c mice were immunized with purified 0.2 mg/ml Bla g2 protein solution as antigen. The mice were immunized for 4 times each time for 1 week. The blood samples were taken from the tail vein of the mice on the 5th day after immunization to prepare the serum of mice. The mice were immunized once on the 6th day and the mice were killed on the 7th day to get the spleen. Spleen cell suspension was prepared. The titer of mouse antiserum was measured and the immune spleen cells were fused with myeloma cells by hybridoma technique. Western blotting was used to detect the specificity of monoclonal antibody. Indirect ELISA was used to determine the titer of monoclonal antibody and double antibody sandwich ELISA was used to identify the subtype of monoclonal antibody. Results the A450 value was still 0.100 when the mouse serum was diluted to 1:16. Two hybridoma cells stably secreting Bla g2 monoclonal antibody were obtained by hybridoma technique and labeled as Bla g2-1. The results of Bla g 2-2.Western blotting showed that. Bla g2-1 and Bla g2-2 monoclonal antibodies were highly specific to Bla g2 protein. The titers of the two monoclonal antibodies detected by indirect ELISA were Bla, respectively. G 2-1 (. 1:16. Bla g _ 2-2: 1: 8 000. The results of double antibody sandwich ELISA showed that monoclonal antibody protein subclasses were immunoglobulin G _ (1) G _ (1) and G _ (1) G _ (1). Conclusion Bla g 2, a monoclonal antibody against Blattella germanica allergen, can bind specifically to Bla g 2 protein.
【作者單位】： 浙江省舟山醫(yī)院檢驗中心;南京醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院臨床實驗室;錦州醫(yī)科大學變態(tài)反應學與臨床免疫學研究中心;
【基金】：國家科學自然基金(No.30972714)~~
【分類號】：R384
【正文快照】： 過敏性疾病是臨床上的常見病和多發(fā)病,并有公司。辣根過氧化物酶化學發(fā)光(ECL)試劑盒購逐年增多趨勢,引起人們的廣泛關注[1]。德國小蠊自美國Pierce公司。其他試劑均為國產分析純。酶(Blattella germanica)是蜚蠊的一種,屬于節(jié)肢動標儀(iM ark)、凝膠成像系統(tǒng)(ChemiD oc XRS)

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