本文關鍵詞：Rab21通過促進EGFR降解負調控EGF激活的MAPK信號通路　出處：《清華大學》2012年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： Rab21 EGFR 降解 內吞 MAPK信號通路

【摘要】：表皮生長因子受體（EGFR或者ErbB1）屬于ErbB受體家族，是一類具有酪氨酸激酶活性的膜受體，，它在細胞的增殖、分化、遷移、粘附及凋亡等多種重要的生命進程中起重要作用。因此EGFR受體必須受到精確的調控以確保體內生理活動的正常進行，而配體介導的細胞表面受體快速內吞即是EGFR信號轉導的一種重要調控機制。在這一過程中，多種磷酸化蛋白、泛素化蛋白和內吞體膜上的蛋白協(xié)同作用，已有研究表明Rab蛋白作為一類通過招募特異效應分子控制囊泡識別轉運的小G蛋白能夠參與到EGFR的內吞轉運中。 為了進一步闡明Rab蛋白通過內吞作用調控信號傳導的分子機制，本論文通過在HEK293T細胞和HeLa細胞中瞬時轉染表達Rab21蛋白的質粒和一系列生物化學和分子生物學的研究方法，深入探究了小G蛋白Rab21對EGFR內吞和降解及其下游信號通路的影響。免疫共沉淀實驗證明Rab21和EGFR之間存在相互作用，同時，細胞免疫熒光染色實驗說明Rab21與內吞的EGFR共定位。另外，細胞免疫熒光實驗證明Rab21能夠改變細胞內EGFR的分布狀態(tài)，促進EGFR內吞。進一步研究揭示Rab21能夠促進EGF非依賴和EGF依賴兩種模式下的EGFR降解。此外，磷酸化ERK水平的檢測和熒光素酶報告實驗均表明Rab21能夠下調EGF介導的MAPK信號通路。 綜上所述，Rab21能夠通過促進EGFR降解和內吞抑制EGF介導的MAPK信號通路。這為深刻理解配體介導的受體內吞這一經典負反饋調控過程的分子機制提供了有力證據。
[Abstract]:Epidermal growth factor receptor (EGFR) or ErbB1) belongs to the ErbB receptor family. It is a kind of membrane receptor with tyrosine kinase activity. It proliferates, differentiates and migrates in cells. Adhesion and apoptosis play an important role in many important life processes. Therefore, EGFR receptors must be precisely regulated to ensure normal physiological activities in vivo. Ligand-mediated rapid endocytosis of cell surface receptors is an important regulatory mechanism of EGFR signal transduction. In this process, many phosphorylated proteins, ubiquitin proteins and proteins on endocytosis membrane act synergistically. It has been shown that Rab protein can participate in the endocytosis of EGFR as a kind of small G protein which can control vesicle recognition and transport by recruiting specific effector molecules. In order to further elucidate the molecular mechanism of Rab protein regulating signal transduction through endocytosis. In this paper, the transient transfection of plasmid expressing Rab21 protein in HEK293T cells and HeLa cells and a series of biochemical and molecular biological methods were carried out. The effects of small G protein Rab21 on the endocytosis and degradation of EGFR and its downstream signaling pathway were investigated. The results of immunoprecipitation showed that there was an interaction between Rab21 and EGFR, and at the same time. Cellular immunofluorescence staining showed that Rab21 was colocated with endocytosis EGFR. In addition, cellular immunofluorescence assay showed that Rab21 could change the distribution of EGFR in cells. Promote EGFR endocytosis. Further study revealed that Rab21 can promote the degradation of EGFR in EGF independent and EGF dependent modes. The detection of phosphorylated ERK and luciferase report showed that Rab21 could down-regulate the MAPK signaling pathway mediated by EGF. To sum up. Rab21 can inhibit MAPK signaling pathway mediated by EGF by promoting EGFR degradation and endocytosis. This provides a profound understanding of the molecular mechanism of ligand-mediated endocytosis, a classical negative feedback regulation process. There is strong evidence.
【學位授予單位】：清華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R341

【共引文獻】

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本文編號：1407324