本文關(guān)鍵詞：通過(guò)重編程方法將大鼠肝細(xì)胞誘導(dǎo)為多能干細(xì)胞的研究　出處：《河南師范大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞(iPSCs)是利用特異的誘導(dǎo)因子組合，如重編程因子組合或結(jié)合某些小分子化合物等將成熟的體細(xì)胞去分化為類似于胚胎干細(xì)胞的一種多潛能細(xì)胞。這些細(xì)胞具有胚胎干細(xì)胞的特征，并能分化為三種胚層細(xì)胞。有關(guān)iPSCs的研究極大地促進(jìn)了細(xì)胞的分化調(diào)控、再生醫(yī)學(xué)、細(xì)胞發(fā)育等基礎(chǔ)研究，并有極高的臨床應(yīng)用前景。 本文利用慢病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將重編程因子組合Sox2、Oct4、c-Myc和Klf4導(dǎo)入原代培養(yǎng)的大鼠肝細(xì)胞，對(duì)其進(jìn)行誘導(dǎo)去分化。肝細(xì)胞在含四種重編程因子的重組慢病毒感染7天后，其形態(tài)開(kāi)始發(fā)生改變。將其轉(zhuǎn)移到飼養(yǎng)層細(xì)胞(MEFs)上培養(yǎng)11天后，部分細(xì)胞聚集在一起，呈致密克隆狀生長(zhǎng)，邊界清晰且致密整齊，形成與大鼠胚胎干細(xì)胞相似的克隆。這些克隆細(xì)胞較小、增殖迅速，且在高倍鏡下觀察到細(xì)胞核較大，核質(zhì)比率較高。從克隆形態(tài)初步判斷為大鼠iPSCs克隆，，堿性磷酸酶染色結(jié)果顯示，這些細(xì)胞克隆表達(dá)了高水平的堿性磷酸酶。 采用逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)分別分析誘導(dǎo)的細(xì)胞克隆、大鼠原代培養(yǎng)肝細(xì)胞和大鼠4.5天胚胎中的基因表達(dá)狀況。結(jié)果顯示外源重編程因子(Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4)僅在誘導(dǎo)的細(xì)胞克隆中表達(dá)；大鼠胚胎干細(xì)胞標(biāo)志基因Sox2、Oct4、Nanog、Fgf4、Lin28和Ncam在誘導(dǎo)的細(xì)胞克隆和4.5天大鼠胚胎中均有表達(dá)。進(jìn)一步的免疫熒光染色檢測(cè)結(jié)果顯示，上述誘導(dǎo)的細(xì)胞克隆表達(dá)了大鼠胚胎干細(xì)胞的標(biāo)志蛋白SSEA-1和Nanog。綜上結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)成功地將大鼠原代培養(yǎng)的肝細(xì)胞誘導(dǎo)去分化成了大鼠肝細(xì)胞來(lái)源的iPSCs。
[Abstract]:Induced pluripotent stem cells (iPSCs) is utilized to induce specific factor combination, such as reprogramming factors or a combination with some small molecules will mature somatic cells to differentiate into a pluripotent cells similar to embryonic stem cells. These cells have the characteristics of embryonic stem cells, and can be differentiated into three types germ cell. The research on iPSCs has greatly promoted the differentiation of cells in regenerative medicine, on the basis of cell development, clinical application and high.
In this paper, using lentivirus mediated gene transfection of reprogramming factors Sox2, Oct4, c-Myc and Klf4 into primary cultured rat liver cells, which were induced to differentiation of liver cells 7 days after infection in containing four kinds of reprogramming factors of recombinant lentivirus, the morphology changed to. The transfer to the feeder cells (MEFs) cultured for 11 days, some cells together, a dense colony like growth, boundary clear and dense neat, and formation of rat embryonic stem cell clones similar. These clones were small, rapid proliferation, and at high magnification to observe large nuclei, karyoplasmic ratio high. From the preliminary judgment for clonal morphology of rat iPSCs clone, alkaline phosphatase staining showed that these cells were cloned and expressed high levels of alkaline phosphatase.
Using reverse transcription PCR (RT-PCR) were analyzed and induced cell clone, expression in primary cultured rat hepatocytes and rat embryos in 4.5 days. The results showed that exogenous gene reprogramming factors (Oct4, Sox2, c-Myc and Klf4) expressed only in cell clones induced; rat embryonic stem cell marker gene Sox2 Oct4, Nanog, Fgf4, Lin28, and Ncam were expressed in cell clones induced and 4.5 day rat embryos. Further immunofluorescence staining showed that these clones induced expression of rat embryonic stem cell marker proteins SSEA-1 and Nanog. in conclusion, this experiment successfully primary rat cultured liver cells induced to differentiate into liver cells from rat iPSCs.

【學(xué)位授予單位】：河南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R329

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1365936