本文關(guān)鍵詞：miR-155調(diào)控巨噬細胞炎癥反應(yīng)和脂質(zhì)攝取的作用及機制　出處：《細胞與分子免疫學(xué)雜志》2017年08期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的研究miR-155在調(diào)控巨噬細胞炎癥反應(yīng)及脂質(zhì)攝取中的作用及機制。方法使用(0、25、50、100)μg/m L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激RAW264.7細胞24 h和50μg/m L ox-LDL分別處理RAW264.7細胞0、6、12、24 h后,應(yīng)用實時定量PCR檢測細胞miR-155的水平;將細胞分為對照組、ox-LDL處理組、ox-LDL/陰性對照組、ox-LDL/miR-155拮抗物組、ox-LDL/shRNA陰性對照組、ox-LDL/過氧化物酶體增殖物激活受體γ-短發(fā)夾RNA(PPARγ-shRNA)組。上述細胞樣本用油紅O染色觀察細胞內(nèi)脂滴沉積、Filipin染色檢測細胞ox-LDL攝取情況,膽固醇檢測試劑盒檢測細胞總膽固醇(TC)和游離膽固醇(FC)含量,實時定量PCR分別檢測腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細胞介素1β(IL-1β)、IL-6的mRNA水平;按實驗?zāi)康?分別觀察miR-155拮抗物(對照組、ox-LDL處理組、ox-LDL/陰性對照組、ox-LDL/miR-155拮抗物組)、miR-155模擬物(陰性對照組、miR-155模擬物組)、shRNA干涉PPARγ(對照組、ox-LDL處理組、ox-LDL/shRNA陰性對照組、ox-LDL/PPARγ-shRNA組)對RAW264.7細胞中ox-LDL刺激的作用機制,Western blot法檢測磷酸化的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子3(p-STAT3)、PPARγ、CD36和核因子κBp65(NF-κBp65)的蛋白水平。結(jié)果隨著ox-LDL劑量和處理時間的增加,miR-155的表達水平逐漸升高;油紅O染色、胞內(nèi)膽固醇含量檢測、Filipin染色結(jié)果顯示,ox-LDL/miR-155拮抗物組油紅染色相對吸光度(A)值、TC和FC含量、Filipin的平均熒光強度以及TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的水平低于ox-LDL組、ox-LDL/陰性對照組;同樣地,ox-LDL/PPARγshRNA組油紅O染色A值、TC和FC含量、Filipin的平均熒光強度以及TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的水平低于ox-LDL組、ox-LDL/shRNA陰性對照組;ox-LDL/miR-155拮抗劑組中p-STAT3、PPARγ、CD36和NF-κBp65蛋白表達低于ox-LDL組、ox-LDL/陰性對照組,miR-155模擬物組p-STAT3、PPARγ、CD36和NF-κBp65蛋白表達高于陰性對照組,ox-LDL/PPARγshRNA組中p-STAT3、CD36和NF-κBp65的蛋白表達較ox-LDL/shRNA陰性對照組的表達水平較ox-LDL組顯著降低。結(jié)論 miR-155通過調(diào)控PPARγ,影響STAT3/NF-κB信號通路及CD36的表達,進而影響巨噬細胞的炎癥反應(yīng)和膽固醇代謝。
[Abstract]:Objective to study the role and mechanism of miR-155 in regulating macrophage inflammatory response and lipid uptake. 100) 渭 g / mL oxidized low density lipoprotein (LDL). RAW264.7 cells were treated with 50 渭 g / mL ox-LDL for 24 h and 50 渭 g / mL ox-LDL, respectively. The level of miR-155 was detected by real-time quantitative PCR 24 h after 6o 12h. The cells were divided into two groups: ox-LDL / negative control group, ox-LDL / miR-155 antagonist group, ox-LDL / miR-155 antagonist group and ox-LDL / shRNA negative control group. In the ox-LDL / peroxisome proliferator activated receptor 緯 -short hairpin RNA(PPAR 緯 -shRNA group, the lipid deposition was observed by oil red O staining. The uptake of ox-LDL was detected by Filipin staining, and the total cholesterol (TC) and free cholesterol (FCc) contents were detected by cholesterol detection kit. The mRNA levels of TNF- 偽, IL-1 尾 and IL-6 were measured by real-time quantitative PCR. MiR-155 antagonists (ox-LDL / negative control group, ox-LDL / miR-155 antagonist group) were observed respectively. MiR-155 mimics (negative control group, miR-155 analog group), shRNA interference PPAR 緯 (control group). The mechanism of ox-LDL stimulation in RAW264.7 cells induced by ox-LDL / PPAR 緯 -shRNA in ox-LDL/shRNA negative control group. Western blot assay was used to detect phosphorylated signal transducers and activators of transcription3, p-STAT3 and PPAR- 緯. The protein levels of CD36 and NF- 魏 Bp65 (NF- 魏 Bp65) increased with the increase of ox-LDL dose and treatment time. Oil red O staining and intracellular cholesterol content were detected by Filipin staining. The results of oil red staining showed that the relative absorbance of oil red group was higher than that of ox-LDL / miR-155 antagonist group. The average fluorescence intensity of Filipin and the levels of IL-6 and IL-1 尾 mRNA in TNF- 偽 were lower than those in ox-LDL group. Similarly, the average fluorescence intensity and TNF- 偽 of TNF- 偽 in the oil red O staining group of ox-LDL / PPAR 緯 shRNA group were measured. The levels of IL-6 and IL-1 尾 mRNA were lower than those of ox-LDL group. The expression of pSTAT3PPAR- 緯 CD36 and NF- 魏 Bp65 in ox-LDL/miR-155 antagonist group was lower than that in ox-LDL group. The expression of p-STAT3PPAR 緯 CD36 and NF- 魏 Bp65 protein in ox-LDL / negative control group was higher than that in negative control group. P-STAT3 in ox-LDL/PPAR 緯 shRNA group. The protein expression of CD36 and NF- 魏 Bp65 was significantly lower than that of ox-LDL/shRNA negative control group. Conclusion the expression of NF- 魏 Bp65 protein in ox-LDL group was significantly lower than that in ox-LDL/shRNA negative control group. MiR-155 regulates PPAR 緯. Effects of STAT3 / NF- 魏 B signaling pathway and CD36 expression on macrophage inflammation and cholesterol metabolism.
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)研究生隊;成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院心內(nèi)科;
【分類號】：R392
【正文快照】： 氧化型低密度脂蛋白(oxygenized low densitylipoprotein,ox-LDL)被巨噬細胞大量攝入而誘導(dǎo)的細胞炎癥反應(yīng)是動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)發(fā)生早期的關(guān)鍵性事件[1-2]。非編碼RNA(non-codingRNA),如長鏈非編碼RNA(long chain non-coding RNA,ncRNA)、微小RNA(microRNA,miR

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