埃博拉病毒核蛋白抗體間接ELISA檢測方法的建立
本文關(guān)鍵詞:埃博拉病毒核蛋白抗體間接ELISA檢測方法的建立 出處:《中國病原生物學雜志》2017年01期 論文類型:期刊論文
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【摘要】:目的建立快速而準確的檢測蝙蝠埃博拉病毒(EBOV)核蛋白抗體ELISA方法。方法合成大腸埃希菌系統(tǒng)密碼子優(yōu)化的扎伊爾埃博拉病毒核蛋白羧基端序列,構(gòu)建含His標簽的原核表達載體pET-28(a)-Z-NP,并轉(zhuǎn)化BL21(DE3)感受態(tài)細胞,用1.0mmol/L IPTG誘導表達目的蛋白,目的蛋白經(jīng)親和層析純化后進行SDS-PAGE和Western blot鑒定,以純化蛋白為包被抗原建立抗體間接ELISA方法。結(jié)果成功構(gòu)建原核表達質(zhì)粒pET-28(a)-Z-NP,可溶表達的目的蛋白純化后經(jīng)Western blot檢測,能與His單抗和已知陽性血清特異性反應。建立的ELISA方法檢測輪狀病毒、來賓病毒、漢城病毒、玄松病毒感染蝙蝠血清均無交叉反應,已知陽性血清稀釋至1∶1 600仍為陽性,試驗的批內(nèi)及批間變異系數(shù)均10%。用此方法檢測采自云南省西雙版納地區(qū)的15份棕果蝠血清,其中2份陽性,且與Western blot驗證結(jié)果一致。結(jié)論建立的間接ELISA方法具有較高的敏感性和特異性,可用于蝙蝠扎伊爾埃博拉病毒核蛋白抗體的檢測。
[Abstract]:Objective to establish a rapid and accurate method for the detection of bat Ebola virus (EBOV). Methods the nucleoprotein ELISA method was used to synthesize the carboxyl terminal sequence of Zairian Ebola virus nucleoprotein from Escherichia coli. His tagged prokaryotic expression vector pET-28AL-Z-NPs was constructed and transformed into BL21DE3) -receptive cells. The target protein was induced by 1.0 mmol / L IPTG. The target protein was purified by affinity chromatography and identified by SDS-PAGE and Western blot. Indirect ELISA method was established with purified protein as coating antigen. Results the prokaryotic expression plasmid pET-28(a)-Z-NP was successfully constructed. After purification of the soluble expressed target protein, Western blot was used to detect the specific reaction with His monoclonal antibody and known positive serum. The established ELISA method was used to detect rotavirus and guest virus. There was no cross reaction in the sera of bats infected with Seoul virus and Hyun Sung virus. The known positive serum diluted to 1: 1 600 was still positive. This method was used to detect 15 samples of Rhinolophus rubrum serums collected from Xishuangbanna area of Yunnan Province, of which 2 were positive. Conclusion the indirect ELISA assay has high sensitivity and specificity, and can be used for the detection of nuclear protein antibodies against Ebola virus in bats and Zaire.
【作者單位】: 吉林大學動物醫(yī)學學院;軍事醫(yī)學科學院軍事獸醫(yī)研究所吉林省人獸共患病防控重點實驗室;
【基金】:國家自然科學基金面上項目(No.31572529) 中國軍事醫(yī)學科學院青年創(chuàng)新基金項目(No.2015CXJJ28)
【分類號】:R373
【正文快照】: 埃博拉病毒(Ebolavirus)是世界上公認的致命的病毒之一,由于其引起的疾病-埃博拉出血熱(EbolaHemorrhagic Fever)對人具有高度的傳染性和致死性,所以世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)將其列為潛在的生物戰(zhàn)劑之一[1]。埃博拉病毒屬于單股負鏈RNA病毒目(Mononegavir
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,本文編號:1356365
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