本文關(guān)鍵詞：表達(dá)綠色熒光蛋白的重組人偏肺病毒的構(gòu)建及其致病性的研究　出處：《內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：人偏肺病毒(Human metapneumovirus,HMPV)屬于副粘病毒科偏肺病毒屬,是偏肺病毒屬中唯一能感染人類的單股負(fù)鏈不分節(jié)段RNA病毒�，F(xiàn)有流行病學(xué)資料顯示,HMPV呈全球流行,為兒科較為常見(jiàn)的呼吸道病原。臨床癥狀與肺病毒屬的呼吸道合胞病毒(RSV)感染相似,出現(xiàn)嚴(yán)重的咳嗽,氣管炎和肺炎,經(jīng)常伴有高熱,肌痛和嘔吐,并導(dǎo)致免疫功能不全者死亡。 HMPV主要有A、B兩型,分別以加拿大分離株CAN97-83(NL/1/00)及CAN98-75(NL/1/99)為代表,每型內(nèi)又可分為兩個(gè)不同的亞型。 本研究采用反向遺傳學(xué)技術(shù),在HMPV NL/1/99(B型)代表株基因組內(nèi)插入表達(dá)增強(qiáng)綠色熒光的外源基因,成功救獲了重組病毒rHMPV NL/1/99-EGFP。通過(guò)熒光共聚焦、電鏡觀察及生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)研究,證實(shí)最終拯救出具有感染性的rHMPV NL/1/99-EGFP重組病毒顆粒且救獲病毒保持野生型HMPV的特點(diǎn)。采用改良噬斑形成試驗(yàn)測(cè)定病毒滴度,根據(jù)Reed-Muench的方法比較分析結(jié)果表明,重組病毒rHMPV NL/1/99-EGFP與野生型HMPV NL/1/99的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)曲線及最高生長(zhǎng)滴度基本一致。rHMPV NL/1/99-EGFP在Vero-E6細(xì)胞連續(xù)傳代10次仍保持綠色熒光蛋白的穩(wěn)定表達(dá)及其所有生物學(xué)特性保持不變。在此基礎(chǔ)上,比較研究了rHMPV NL/1/99-EGFP(B型)及rHMPV NL/1/00-EGFP(A型)對(duì)小鼠和各細(xì)胞的致病性,采用改良噬斑形成試驗(yàn)測(cè)定病毒滴度,結(jié)果表明,rHMPV NL/1/00-EGFP的感染性及致病力均比rHMPV NL/1/99-EGFP強(qiáng)。 本研究填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)相同研究領(lǐng)域的空白,首先,重組病毒對(duì)外源基因的穩(wěn)定表達(dá)使HMPV具有作為疫苗載體應(yīng)用的可能性。其次,以EGFP蛋白作為病毒示蹤物對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求不高,便于檢測(cè),使得在rHMPV NL/1/99-EGFP基礎(chǔ)上進(jìn)行病毒致病機(jī)制和基因功能研究變得更為便利。第三,對(duì)兩株重組HMPV致病性的研究為病毒基因組的改造,從而為HMPV減毒活疫苗的研制奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R373

【共引文獻(xiàn)】

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