本文關(guān)鍵詞：弓形蟲ROP18蛋白激酶在酵母中的表達(dá)純化及激酶活性鑒定　出處：《熱帶醫(yī)學(xué)雜志》2016年06期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的建立利用酵母表達(dá)系統(tǒng)獲得有較高激酶活性的弓形蟲棒狀體蛋白(ROP18)激酶的表達(dá)純化方法。方法利用PCR技術(shù)從弓形蟲基因組DNA擴(kuò)增弓形蟲ROP18基因,通過Gateway系統(tǒng)將ROP18基因克隆到酵母表達(dá)載體pEGH-A中。將表達(dá)載體pEGH-A-ROP18轉(zhuǎn)化至Y258酵母菌株中并誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物純化后通過SDS-PAGE進(jìn)行純度鑒定;最后通過激酶活性實(shí)驗(yàn)對(duì)純化的重組蛋白進(jìn)行激酶活性鑒定。結(jié)果構(gòu)建了弓形蟲ROP18激酶重組表達(dá)質(zhì)粒pEGH-A-ROP18和pEGH-A-ROP18-KD,并成功在酵母表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)弓形蟲ROP18重組蛋白,其分子量約為8.2×10~4 Mr,SDS-PAGE蛋白電泳顯示為單一條帶,并具有較高的激酶活性。結(jié)論利用酵母細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)并純化了有激酶活性的弓形蟲ROP18蛋白激酶。
【作者單位】： 中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院;中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院熱帶病防治研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81328014) 廣東省自然科學(xué)基金(2015A030313105) 廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014A020214002)
【分類號(hào)】：R382.5
【正文快照】： 弓形蟲屬于頂端復(fù)合物亞門,是一種世界性分布的重要條件性致病病原體,幾乎可以感染所有有核細(xì)胞[1]。全世界估計(jì)三分之一的人群被感染弓形蟲[2],中國(guó)人群的感染率約為5%~10%[3]。弓形蟲感染宿主時(shí),其棒狀體可向宿主細(xì)胞分泌棒狀蛋白(rhoptries protein,ROP),其中ROP18是弓形蟲，

本文編號(hào)：1322972