本文關(guān)鍵詞：熒光報告系統(tǒng)驗證miR-142-5p的靶基因Becn1

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【摘要】：目的驗證miR-142-5p的靶基因——自噬相關(guān)基因Becn1。方法生物信息學預測miR-142-5p與Becn1的結(jié)合位點,構(gòu)建含有結(jié)合位點的Becn1基因3'UTR野生型和突變型質(zhì)粒,將重組質(zhì)粒與miR-142-5p-mimics或miR-NC共轉(zhuǎn)染C2C12細胞,檢測熒光素酶活性。結(jié)果 miR-142-5p與Becn1的3'UTR存在一個結(jié)合位點(123~129);成功構(gòu)建野生型重組質(zhì)粒p GL3-Becn1-3'UTR和靶位點含3個堿基突變的重組質(zhì)粒Mut-3'UTR;與共轉(zhuǎn)染p GL3-Becn1-3'UTR和miR-NC組相比,共轉(zhuǎn)染p GL3-Becn1-3'UTR和miR-142-5p-mimics組熒光素酶活性顯著下降,約為41.2%(P0.01);而與對照組相比,共轉(zhuǎn)染Mut-3'UTR和miR-142-5p-mimics組的熒光素酶活性下降不明顯(P0.05)。結(jié)論初步驗證自噬相關(guān)基因Becn1是miR-142-5p的靶基因。
【作者單位】： 廣東醫(yī)學院衰老研究所;廣東醫(yī)學院醫(yī)學檢驗學院;廣東省醫(yī)學分子診斷重點實驗室;
【基金】：國家自然科學基金項目(No.81170327) 廣東省醫(yī)學科研基金(No.A2014470) 東莞市科技計劃項目與醫(yī)療衛(wèi)生一般項目(No.2012108102022,201410515200159) 廣東醫(yī)學院科研基金項目(No.XK1412,ZZDC006,ZZDC009,STIF201102)
【分類號】：R3416
【正文快照】： MicroRNAs(miRNAs)通過識別靶mRNA的3'UTR區(qū),降解靶基因或抑制其翻譯,從而抑制蛋白質(zhì)的合成,達到調(diào)控基因表達的目的〔1,2〕。雙熒光素酶檢測是目前判定miRNA是否與靶基因3'UTR結(jié)合的基本實驗方法。miR-142前體經(jīng)加工可產(chǎn)生成熟的兩個miRNA,分別為miR-142-5p和miR-142-3p,成熟

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 趙江;董興有;楊星亮;王亮;李龍坤;周占松;宋波;;人和大鼠膀胱平滑肌細胞存在低水平的自噬[J];第三軍醫(yī)大學學報;2014年13期

2 涂平華;李開庭;陳青;歐云生;白定群;;蘆薈大黃素介導的光動力誘導骨肉瘤MG63細胞自噬[J];第二軍醫(yī)大學學報;2014年12期

3 涂s，

本文編號：1272605