本文關鍵詞：B群腦膜炎奈瑟菌NMB0315核酸疫苗與重組蛋白疫苗聯(lián)合免疫效果初探

  更多相關文章： B群腦膜炎奈瑟菌 外膜蛋白NMB0315 核酸疫苗 蛋白疫苗 聯(lián)合免疫效果

【摘要】：[目的]初步探討和評價NMB0315核酸疫苗、重組蛋白疫苗及核酸疫苗+重組蛋白疫苗聯(lián)合免疫誘導小鼠產(chǎn)生特異性體液/細胞免疫應答水平及其免疫保護效果,為研制高效B群流腦疫苗提供可靠實驗依據(jù)。[方法]1.對本課題組保存的真核表達重組質粒pcDNA3.1(+)/NMB0315進行鑒定后,大量制備并純化;肌肉注射免疫雌性BALB/c小鼠,采用間接ELISA法檢測免疫小鼠血清中特異性IgG、生殖道黏膜分泌物中特異性s IgA抗體水平及免疫小鼠脾淋巴細胞培養(yǎng)上清液中IFN-γ、IL-4含量,CCK8法測定小鼠脾淋巴細胞增殖刺激指數(shù)(SI);2.對本課題組保存的含原核重組質粒pET-30a/NMB0315的E.coli BL21誘導表達重組蛋白;腹腔注射免疫雌性BALB/c小鼠,分析其誘導的體液免疫和細胞免疫應答水平。3.大量制備NMB0315核酸疫苗和重組蛋白疫苗,采用核酸初免-蛋白加強(DNA prime-protein boost)方法,聯(lián)合免疫雌性BALB/c小鼠,測定特異性體液/細胞免疫應答水平、免疫血清體外殺菌效價,觀察聯(lián)合免疫對感染B群腦膜炎球菌小鼠的免疫保護效果。[結果]1.NMB0315核酸疫苗具有良好的免疫原性,免疫小鼠血清特異性Ig G水平及生殖道黏膜sIg A水平隨免疫時間呈上升趨勢,免疫后第八周抗體效價分別為1:45,000和1:30,000,明顯高于對照組PBS、pcDNA3.1(+)、CpG(P0.01);小鼠脾淋巴細胞增殖刺激指數(shù)SI(2.112±0.342)、細胞因子IFN-γ(142.31±19.45 pg/mL)及IL-4(178.04±18.38 pg/mL)水平均明顯高于對照組pbs、pcdna3.1(+)、cpg(p0.01)。2.nmb0315蛋白疫苗誘導小鼠產(chǎn)生了高水平的體液免疫應答,特異性igg水平隨免疫時間呈升高趨勢,第8周效價達1:180,000;siga水平也呈升高趨勢,第8周效價為1:40,000;免疫第八周與體液免疫有關的細胞因子il-4含量為248.47±23.37pg/ml,與細胞免疫有關的ifn-γ含量為198.12±20.02pg/ml,小鼠脾細胞刺激指數(shù)si為1.631±0.062,上述免疫指標均明顯高于pbs和fa對照組(p0.01)。3.核酸初免-蛋白加強的聯(lián)合免疫誘導的血清特異性igg,igg1,igg2a,igg2b和igg3水平及生殖道灌洗液中特異性siga水平在第八周達到峰值,抗體效價分別為1:150,000、1:70,000、1:50,000、1:22,000、1:45,000、1:30,000,脾淋巴細胞誘生的il-4含量為219.58±20.01pg/ml,上述與體液免疫相關指標均較單一重組蛋白疫苗組低(p0.05);小鼠脾淋巴細胞刺激指數(shù)(si:2.185±0.086)及ifn-γ(226.60±22.76pg/ml)這些與細胞免疫有關的指標均明顯高于重組蛋白疫苗組(p0.05);核酸疫苗組、重組蛋白疫苗組和聯(lián)合免疫疫苗組免疫血清在補體介導下的體外殺菌效價分別為1:64、1:128和1:128,72小時內對實驗小鼠的免疫保護率分別為70%、95%和80%。4.免疫2、4、6、8w時,核酸疫苗組、重組蛋白疫苗組和聯(lián)合免疫疫苗組igg2a/igg1比值均小于1。[結論]1.nmb0315疫苗誘導體液免疫(包括黏膜免疫)的效果為:重組蛋白疫苗組聯(lián)合免疫疫苗組核酸疫苗組;誘導細胞免疫的效果為:聯(lián)合免疫疫苗組核酸疫苗組重組蛋白疫苗組;2.nmb0315疫苗72小時內對實驗小鼠的免疫保護效果為:重組蛋白疫苗組聯(lián)合免疫疫苗組核酸疫苗組。
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R392

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