本文關(guān)鍵詞：小反芻獸疫病毒H蛋白的原核表達(dá)及其多克隆抗體的制備

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【摘要】：目的對(duì)小反芻獸疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)弱毒疫苗株血凝素蛋白(H)主要抗原表位區(qū)進(jìn)行克隆及原核表達(dá),并制備鼠抗PPRV H蛋白多克隆抗體。方法根據(jù)Gen Bank中登錄的PPRV弱毒疫苗株H基因序列設(shè)計(jì)引物,RT-PCR擴(kuò)增其主要抗原表位區(qū)域(去掉信號(hào)肽及跨膜區(qū));將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆至表達(dá)載體p ET-30a(+)后,轉(zhuǎn)化E.coli Transetta(DE3),經(jīng)IPTG 37℃誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白;表達(dá)的目的蛋白經(jīng)帶His標(biāo)簽的鎳離子蛋白純化柱純化后,進(jìn)行SDS-PAGE及Western blot鑒定;將純化的H蛋白與弗氏佐劑混合乳化后免疫昆明鼠,3次免疫2周后采血,分離血清,制備鼠抗PPRV H蛋白多克隆抗體,采用間接免疫熒光試驗(yàn)進(jìn)行鑒定。結(jié)果質(zhì)粒p ET-30a(+)-H經(jīng)雙酶切鑒定證明構(gòu)建正確;表達(dá)的目的蛋白相對(duì)分子質(zhì)量約60 000,能同時(shí)被抗His標(biāo)簽抗體和PPRV陽性綿羊血清識(shí)別,主要以包涵體形式存在,表達(dá)量約占菌體總蛋白的48%,純度可達(dá)90%以上;制備的多克隆抗體能夠識(shí)別PPRV全病毒抗原以及桿狀病毒表達(dá)的重組PPRV H蛋白。結(jié)論成功構(gòu)建了質(zhì)粒p ET-30a(+)-H,并表達(dá)了PPRV H蛋白,制備的鼠源多克隆抗體為建立針對(duì)PPRV H蛋白的ELISA抗體檢測方法及研制新型亞單位疫苗奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所吉林省人獸共患病預(yù)防與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;吉林大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院;吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;江蘇省動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;
【基金】：國家科技支撐計(jì)劃(2015BAD12B04)
【分類號(hào)】：R392-33
【正文快照】： 小反芻獸疫(peste des petits ruminants,PPR)是由PPR病毒(PPR virus,PPRV)引起的急性或亞急性傳染病,主要危害山羊、綿羊、羚羊等小反芻動(dòng)物,而綿羊與山羊較易感,其中山羊高度易感,嚴(yán)重時(shí)發(fā)病率可達(dá)100%[1-2]。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(Office Inte-rnational Des Epizooties,OIE)將

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