本文關(guān)鍵詞：miR-93真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá)驗證

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【摘要】：目的構(gòu)建人miR-93真核表達(dá)載體,并驗證其表達(dá)效果,為進(jìn)一步研究miR-93的生物學(xué)功能提供有利工具。方法用PCR方法從293T細(xì)胞基因組DNA中擴增miR-93前體序列,引物引入酶切位點和保護(hù)堿基,產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶EcoRⅠ和BglⅡ雙酶切后插入pEZX-MR04表達(dá)載體中,構(gòu)建miR-93真核表達(dá)載體pEZX-MR04-miR-93。構(gòu)建好的載體用雙酶切、PCR和測序鑒定,同時轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,用Real time PCR檢測重組pEZX-MR04-miR-93質(zhì)粒的miR-93表達(dá)效率。結(jié)果成功構(gòu)建miR-93真核表達(dá)載體pEZX-MR04-miR-93,重組pEZX-MR04-miR-93質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后miR-93表達(dá)上升約21倍。結(jié)論構(gòu)建的miR-93真核表達(dá)載體pEZX-MR04-miR-93可顯著上調(diào)細(xì)胞中miR-93水平,為進(jìn)一步研究miR-93在泌尿系腫瘤中的生物學(xué)功能提供可靠工具,奠定了堅實的實驗基礎(chǔ)。
【作者單位】： 西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科;
【關(guān)鍵詞】： miR- 表達(dá)載體 pEZX-MR T
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.81572516) 陜西省國際科技合作與交流計劃項目(No.2016KW-021)
【分類號】：R3416
【正文快照】： 微小RNA(microRNA,miR)是一類廣泛存在于生物體內(nèi)的長度約為19~25個堿基的單鏈非編碼RNA,自被發(fā)現(xiàn)以來,數(shù)以千計的microRNA相繼被報道并研究。越來越多的研究證實,microRNA可廣泛參與生物體的各項生物學(xué)行為,包括腫瘤的進(jìn)展、生物體的發(fā)育、心腦血管疾病、骨關(guān)節(jié)炎等。人miR-9

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本文編號：1112484