本文關(guān)鍵詞：老齡化大鼠MSCs衰老的發(fā)生及Nampt表達(dá)與意義

  更多相關(guān)文章： 煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶 間充質(zhì)干細(xì)胞 細(xì)胞衰老 老齡化個(gè)體

【摘要】：生物體衰老的本質(zhì)是自身干細(xì)胞的衰老。如何通過調(diào)控使衰老的干細(xì)胞“重返青春”,更好地延緩衰老及防治老齡化疾病,是亟待解決的關(guān)鍵問題。間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)由于其多項(xiàng)優(yōu)點(diǎn),現(xiàn)已成為自體干細(xì)胞移植的理想種子細(xì)胞。然而,取自老齡個(gè)體的MSCs因機(jī)體生理性衰老,其功能降低,嚴(yán)重制約了老年患者自體干細(xì)胞移植的療效,也是老年個(gè)體各器官功能下降的主要原因。2009年Imai等首次提出了“NAD World”的衰老理論。NAD+作為紐帶,將Nampt與Sirt1緊密相連,共同構(gòu)成哺乳動(dòng)物的衰老調(diào)控網(wǎng)絡(luò),對(duì)能量代謝、細(xì)胞衰老及生命周期的維持起重要作用。然而迄今為止,以NAD+為中心的哺乳動(dòng)物衰老理論研究多集中于成體細(xì)胞,Nampt是否可以通過調(diào)節(jié)NAD+-Sirt1影響干細(xì)胞衰老尚不清楚。結(jié)合我們前期實(shí)驗(yàn),在MSCs體外復(fù)制性衰老過程中,Nampt表達(dá)逐漸降低,Nampt可能對(duì)MSCs復(fù)制性衰老具有調(diào)控作用。我們推測(cè),Nampt對(duì)老齡化大鼠MSCs的自然衰老也具有調(diào)控作用。本研究以老齡化大鼠(15-18月齡)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)為研究對(duì)象,同時(shí)以年輕大鼠(1-2月齡)MSCs為對(duì)照,通過觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,分析其細(xì)胞增殖能力及細(xì)胞周期,檢測(cè)自然衰老過程中MSCs的生物學(xué)特性。通過檢測(cè)衰老相關(guān)b-半乳糖苷酶(SA-β-gal)活性、細(xì)胞內(nèi)氧化與抗氧化水平、DNA損傷情況、端粒酶活性及衰老相關(guān)因子的表達(dá),明確MSCs細(xì)胞衰老的發(fā)生。應(yīng)用RT-q PCR、Western blot及細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)MSCs自然衰老中Nampt的表達(dá),并通過檢測(cè)MSCs中Sirt1表達(dá)與活性以及細(xì)胞內(nèi)NAD+含量,初步探討其可能的調(diào)控機(jī)制。所得結(jié)果如下:1.老齡化大鼠MSCs呈現(xiàn)衰老的形態(tài)學(xué)特征,細(xì)胞長(zhǎng)寬比減低,細(xì)胞面積增加;細(xì)胞生長(zhǎng)增殖速度減慢,多數(shù)細(xì)胞阻滯于G0/G1期。2.在大鼠生理性衰老過程中,MSCs出現(xiàn)自然衰老。老齡化大鼠MSCs中SA-β-gal活性增強(qiáng),細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平增加而抗氧化能力降低,細(xì)胞內(nèi)DNA損傷程度加劇、細(xì)胞端粒酶活性減低以及衰老相關(guān)因子pl6~(INK4A)和p21WAF1/CIP表達(dá)上調(diào)。3.隨著MSCs自然衰老的出現(xiàn),Nampt表達(dá)明顯降低,使細(xì)胞內(nèi)NAD+含量下降,進(jìn)一步引起Sirt1表達(dá)及活性下調(diào)。綜上所述,在自然衰老的MSCs中Nampt表達(dá)下調(diào),Nampt可能通過抑制NAD+的合成使Sirt1表達(dá)及活性降低,從而發(fā)揮其對(duì)干細(xì)胞衰老的調(diào)控作用。本研究為闡明干細(xì)胞衰老的機(jī)制開辟了新途徑,也為延緩干細(xì)胞衰老及治療老齡化疾病提供了新思路與新靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶 間充質(zhì)干細(xì)胞 細(xì)胞衰老 老齡化個(gè)體
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R339.38
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 英文縮略詞索引9-13
• 第1章 文獻(xiàn)綜述13-20
• 1.1 細(xì)胞衰老13-14
• 1.1.1 細(xì)胞衰老類型13-14
• 1.1.2 細(xì)胞衰老的特征14
• 1.2 細(xì)胞衰老的常用檢測(cè)指標(biāo)14-16
• 1.3 干細(xì)胞衰老16
• 1.4 煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶16-19
• 1.4.1 Nampt概述16-17
• 1.4.2 Nampt與年齡相關(guān)性疾病17-18
• 1.4.3 Nampt-NAD+-Sirt1哺乳動(dòng)物衰老調(diào)控網(wǎng)絡(luò)18-19
• 1.5 研究意義19-20
• 第2章 實(shí)驗(yàn)研究20-47
• 第一節(jié) 老齡化大鼠MSCs的生物學(xué)特性20-26
• 1.實(shí)驗(yàn)材料20-21
• 1.1 主要設(shè)備與器材20
• 1.2 主要試劑20-21
• 1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物21
• 1.4 主要液體配制21
• 2.實(shí)驗(yàn)方法21-23
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)21-22
• 2.2 自然衰老狀態(tài)下MSCs的生物學(xué)特性22-23
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析23
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-26
• 3.1 MSCs的分離與培養(yǎng)23-24
• 3.2 老齡化大鼠MSCs的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)24-25
• 3.3 自然衰老對(duì)MSCs生長(zhǎng)及增殖能力的影響25
• 3.4 自然衰老狀態(tài)下MSCs細(xì)胞周期的變化25-26
• 第2節(jié) 老齡化大鼠MSCs細(xì)胞衰老的發(fā)生26-40
• 1.實(shí)驗(yàn)材料26-29
• 1.1 主要儀器設(shè)備與器材26-27
• 1.2 主要試劑27-29
• 2.實(shí)驗(yàn)方法29-36
• 2.1 MSCs細(xì)胞衰老的檢測(cè)29-36
• 2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析36
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-40
• 3.1 自然衰老狀態(tài)下MSCs細(xì)胞衰老的檢測(cè)36
• 3.2 MSCs細(xì)胞凋亡的檢測(cè)36-37
• 3.3 自然衰老狀態(tài)下MSCs內(nèi)氧化與抗氧化水平的測(cè)定37-38
• 3.4 自然衰老狀態(tài)下MSCs內(nèi)DNA損傷情況的檢測(cè)38-39
• 3.5 自然衰老對(duì)MSCs端粒酶活性的影響39-40
• 3.6 MSCs中衰老相關(guān)因子pl6~(INK4A)、p21~(WAF1/ CIP1)的表達(dá)40
• 第3節(jié)Nampt在老齡化大鼠MSCs中的表達(dá)及意義40-47
• 1 實(shí)驗(yàn)材料40-41
• 2 實(shí)驗(yàn)方法41-43
• 2.1 Nampt在老齡化大鼠MSCs中的表達(dá)41-42
• 2.2 老齡化大鼠MSCs中Sirt1的表達(dá)42
• 2.3 老齡化大鼠MSCs中NAD+含量的檢測(cè)42
• 2.4 老齡化大鼠 MSCs中NAD+含量的檢測(cè)42-43
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析43
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-47
• 3.1 自然衰老對(duì)MSCs中Nampt表達(dá)的影響43-44
• 3.2 自然衰老對(duì)MSCs中Sirt1表達(dá)的影響44-45
• 3.3 自然衰老對(duì)MSCs中NAD+含量的影響45-46
• 3.4 自然衰老對(duì) MSCs 細(xì)胞內(nèi) NAD+含量的影響46-47
• 第3章 討論47-52
• 3.1 自然衰老狀態(tài)下MSCS的生物學(xué)特性47-48
• 3.2 老齡化大鼠MSCS細(xì)胞衰老的發(fā)生48-49
• 3.3 Nampt在老齡化大鼠MSCS衰老中的表達(dá)及意義49-52
• 第4章 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-62
• 作者簡(jiǎn)介及科研成果62-63
• 致謝63

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1 魯揮,何憲平;衰老的研究與進(jìn)展[J];中等醫(yī)學(xué)教育;2000年S1期

2 張波,劉承蕓,孟紫強(qiáng);復(fù)制衰老的分子生物學(xué)進(jìn)展[J];生命科學(xué)研究;2002年S1期

3 肖政華;張光奇;;衰老的分子基因水平研究[J];貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2006年03期

4 楊發(fā)亮;房冬梅;鄒銀平;;淺析運(yùn)動(dòng)延緩衰老的機(jī)制[J];內(nèi)江科技;2011年10期

5 王福龍;王甄真;陳雁;;衰老的分子機(jī)制與干預(yù)研究的最新進(jìn)展[J];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2012年08期

6 孫明德;鄭集;;衰老的起因和機(jī)制[J];生理科學(xué)進(jìn)展;1981年02期

7 吳鏡海;;人類生理衰老生物學(xué)[J];海南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1985年03期

8 Roy A K;汪義和;;各種衰老理論的評(píng)價(jià)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(老年醫(yī)學(xué)分冊(cè));1986年04期

9 陳禮湘;老年生理(1)[J];護(hù)士進(jìn)修雜志;1992年01期

10 劉俊達(dá);衰老和老年病的分子機(jī)理[J];老年學(xué)雜志;1993年06期

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1 朱漢民;;衰老的生物指標(biāo)[A];中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)第三屆老年?duì)I養(yǎng)暨第二屆營(yíng)養(yǎng)與腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];1994年

2 傅文慶;;衰老及其治療[A];老齡問題研究論文集（七）[C];2005年

3 童坦君;張宗玉;王文恭;;衰老相關(guān)基因研究進(jìn)展[A];老齡問題研究論文集（十一）——積極老齡化研究之三[C];2006年

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本文編號(hào)：1101017