本文關(guān)鍵詞：C反應(yīng)蛋白對3T3-L1脂肪細(xì)胞總脂聯(lián)素和高分子量多聚體脂聯(lián)素的影響及其調(diào)控機(jī)制

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【摘要】：目的觀察C反應(yīng)蛋白(CRP)對3T3-L1脂肪細(xì)胞總脂聯(lián)素(Adiponectin)及各聚體表達(dá)的影響,并進(jìn)一步探討其調(diào)控機(jī)制。方法1.3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化成熟后,予CRP重組蛋白干預(yù),分別用Real-time PCR觀察總脂聯(lián)素mRNA變化,Western blot方法明確其對脂聯(lián)素以及高分子量脂聯(lián)素蛋白表達(dá)的影響。2.細(xì)胞免疫熒光方法檢測CRP干預(yù)后,3T3-L1脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素蛋白表達(dá)變化。3.Western blot檢測CRP刺激后,總脂聯(lián)素及各聚體(低聚體(low-molecular-weight,LMW)、中聚體(middle-molecular-weight,MMW)、高聚體(high-molecular-weight,HMW))表達(dá)變化。Real-time PCR檢測脂聯(lián)素多聚化相關(guān)調(diào)控基因Erp44、Ero1-α和DsbA-L表達(dá)水平。4.3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化成熟后,分別加入CRP、磷脂酰肌醇3酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI-3K)信號通路抑制劑LY294002、蛋白激酶B(PKB/Akt)磷酸化抑制劑T3830,real-time PCR、Western blot等方法,檢測總脂聯(lián)素mRNA和蛋白表達(dá)水平,Western blot方法檢測高分子量多聚體脂聯(lián)素表達(dá)水平。結(jié)果1.Real-time PCR及Western blot結(jié)果均顯示,作用24h后,5μg/m L CRP對總脂聯(lián)素?zé)o明顯影響,25μg/mL CRP對總脂聯(lián)素表達(dá)的抑制具有統(tǒng)計學(xué)意義,50μg/mL CRP對總脂聯(lián)素的抑制作用更為明顯,呈劑量依賴。50μg/mL CRP干預(yù)6h后,總脂聯(lián)素表達(dá)無變化,干預(yù)12h對總脂聯(lián)素產(chǎn)生抑制作用,而24h更明顯,呈時間依賴。2.免疫熒光顯示,50μg/m L顯著抑制3T3-L1脂肪細(xì)胞內(nèi)脂聯(lián)素表達(dá)。3.Western blot結(jié)果顯示,作用24h后,5μg/mL CRP對高分子量多聚體脂聯(lián)素?zé)o明顯影響,25μg/m L CRP顯著抑制高分子量多聚體脂聯(lián)素蛋白表達(dá),50μg/mL CRP的抑制作用更為明顯,呈劑量依賴。50μg/mL CRP干預(yù)細(xì)胞6h后,高分子量多聚體脂聯(lián)素?zé)o明顯變化,12h后,高分子量多聚體脂聯(lián)素蛋白表達(dá)顯著降低,24h后更明顯,呈時間依賴。4.Western blot結(jié)果顯示,50μg/mL CRP作用24h后,總脂聯(lián)素表達(dá)降低。低聚體無顯著變化,中聚體表達(dá)降低,高分子量多聚體表達(dá)降低且更為明顯。HMW/total adiponectin比值降低。Real-time PCR顯示,adiponectin多聚化相關(guān)基因Erp44表達(dá)上升,Ero1-α與DsbA-L表達(dá)下降。5.在3T3-L1脂肪細(xì)胞中,分別加入PI3K抑制劑LY294002和Akt磷酸化抑制劑T3830,結(jié)果顯示,均可部分逆轉(zhuǎn)CRP對脂聯(lián)素的抑制作用。結(jié)論1.CRP抑制總脂聯(lián)素和高分子量脂聯(lián)素的表達(dá),且呈時間與劑量依賴。2.CRP對高分子量多聚體的抑制作用更為明顯,且影響了脂聯(lián)多聚化相關(guān)基因表達(dá)水平。3.CRP對脂聯(lián)素的抑制作用可部分通過PI3K-Akt信號通路進(jìn)行調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：C反應(yīng)蛋白 3T3-L1脂肪細(xì)胞 脂聯(lián)素 高分子量多聚體脂聯(lián)素 PI3K/Akt信號通路
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R3411
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-13
• 緒論13-14
• 第一章 CRP對脂肪細(xì)胞中總脂聯(lián)素表達(dá)的影響14-31
• 1.1 引言14
• 1.2 實(shí)驗(yàn)材料14-19
• 1.3 實(shí)驗(yàn)方法19-25
• 1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-29
• 1.5 討論29-30
• 1.6 本章小結(jié)30-31
• 第二章 CRP對脂聯(lián)素各聚體表達(dá)及多聚化的影響31-43
• 2.1 引言31-32
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料32-36
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法36
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-40
• 2.5 討論40-42
• 2.6 本章小結(jié)42-43
• 第三章 CRP對脂聯(lián)素表達(dá)影響的分子機(jī)制初步研究43-53
• 3.1 引言43
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料43-45
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法45
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果45-50
• 3.5 討論50-52
• 3.6 本章小結(jié)52-53
• 第四章 主要結(jié)論與展望53-54
• 4.1 主要結(jié)論53
• 4.2 展望53-54
• 參考文獻(xiàn)54-61
• 綜述61-70
• 參考文獻(xiàn)66-70
• 致謝70-71
• 在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及其他科研成果71-72

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本文編號：1053276